【摘 要】
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目的评价激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对老龄小鼠脓毒症的影响及其与自噬的关系。方法实验Ⅰ 雌性SPF级C57BL/6小鼠28只，16～19月龄，体重25～35 g，采用随机数字表法分为2组(n＝14)：脓毒症(S组)和脓毒症＋AMPK激动剂AICAR组(S＋A组)。S＋A组给予0.5 ml AICAR灌胃，用5%二甲基亚砜溶解，S组给予5%二甲基亚砜0.5 ml灌胃，连续灌胃7 d，1次/d。
【机 构】
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大连医科大学附属第二医院麻醉科 116027,大连医科大学附属第二医院麻醉科 116027,大连医科大学附属第二医院麻醉科 116027,
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目的评价激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对老龄小鼠脓毒症的影响及其与自噬的关系。
方法实验Ⅰ 雌性SPF级C57BL/6小鼠28只，16～19月龄，体重25～35 g，采用随机数字表法分为2组(n＝14)：脓毒症(S组)和脓毒症＋AMPK激动剂AICAR组(S＋A组)。S＋A组给予0.5 ml AICAR灌胃，用5%二甲基亚砜溶解，S组给予5%二甲基亚砜0.5 ml灌胃，连续灌胃7 d，1次/d。记录给药前后体重。给药结束后腹腔注射小鼠盲肠内容物浆液200 μl建立脓毒症模型。每组取9只小鼠，造模后观察7 d，记录生存情况。于造模后24 h时，每组处死5只小鼠，取脾脏组织，采用Western blot法检测AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)和LC3Ⅱ的表达水平，计算p-AMPK/AMPK比值和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。实验Ⅱ 雌性SPF级C57BL/6小鼠10只，16～19月龄，体重25～35 g。取5只小鼠，提取并培养原代腹腔巨噬细胞，采用随机数字表法分为2组(n＝5)：对照组(C组)和EGFP E.Coli组(E组)。余下5只小鼠给予0.5 ml AICAR灌胃7 d，1次/d。灌胃结束后提取并培养原代腹腔巨噬细胞，采用随机数字表法分为2组(n＝5)：AICAR＋EGFPE.Coli组(A＋E组)和AICAR＋自噬抑制剂3-甲基腺苷(3-MA)＋EGFP E.Coli组(A＋M＋E组)。A＋M＋E组先加入5 mmol/L 3-MA 100 μl孵育1 h；然后E组、A＋E组和A＋E＋M组加入表达EGFP的E.Coli.50 μl孵育1 h。采用流式细胞术测定巨噬细胞吞噬能力。
结果实验Ⅰ与给药前比较，给药结束后S＋A组体重降低(P<0.05)；与S组比较，S＋A组给药结束后体重降低，造模后7 d生存率提高，脾脏组织LC3Ⅱ表达上调，p-AMPK/AMPK比值和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)。实验Ⅱ与C组比较，其余3组巨噬细胞吞噬能力增强(P<0.05)；与E组比较，A＋E组巨噬细胞吞噬能力增强(P<0.05)，A＋M＋E组巨噬细胞吞噬能力差异无统计学意义(P>0.05)；与A＋E组比较，A＋M＋E组巨噬细胞吞噬能力减弱(P<0.05)。
结论激活AMPK可提高脓毒症老龄小鼠的生存率，其机制与增强巨噬细胞自噬水平有关。
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