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热不对称交错PCR(TAIL—PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL—PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL—PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列GbchsJ,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明,Gbchs2长1238bp,编码304个氨