探讨外源性白细胞介素 (IL) -2和IL-23对小鼠类结合蛋白 (IRBP) 特异性T细胞向辅助性T细胞 (Th) 1、Th17分化的诱导及致病性的研究。
方法实验研究。向30只雌性C57BL/6小鼠 (6~ 8周) 皮下注射200μl含200μg人IRBP 1~ 20和0.8 mg结核分枝杆菌的乳糜液,建立实验性自身免疫性葡萄膜炎 (EAU) 动物模型。在免疫后第13天取出小鼠脾脏和引流淋巴结,预留部分脾脏通过逆转录 (RT) -PCR法检测其中干扰素 (IFN) -γmRNA与IL-17 mRNA的表达水平,作为正常对照组。其余脾脏在纱网研磨后用尼龙毛富集的方法提取小鼠T细胞,将其分为IL-2组和IL-23组,均加入抗原递呈细胞和IRBP 1~ 20,分别加入外源性小鼠重组IL-2与IL-23。在培养后第2天用Ficoll密度梯度离心方法分离T细胞,RT-PCR法检测T细胞中IFN-γmRNA与IL-17 mRNA的表达情况,同时取T细胞上清液用酶联免疫吸附试验检测上清中IFN-γ与IL-17的含量。继续培养到第4天,利用流式细胞仪检测不同干预条件下IL-17+γδ+T细胞的比例。取30只小鼠建立EAU模型后,取出T细胞,按照以上方法建立IL-2组和IL-23组IRBP特异性T细胞。另取6只小鼠随机分为两组,分别腹腔内注射IL-2组与IL-23组的T细胞,剂量为3.5×106个/只。在注射后第3、7、14天通过间接眼底镜观察小鼠的眼部发病情况,在第21天处死小鼠取出小鼠眼球做病理切片,观察IL-2组和IL-23组小鼠眼部病理变化。分别采用秩和检验、单因素方差分析和配对t检验对实验数据进行统计分析。
结果在抗原和外源性IL刺激后第2天,T细胞出现明显的“玫瑰花环”现象。RT-PCR检测结果显示,IL-2组中IFN-γmRNA的表达水平 (0.26±0.02) 明显高于正常对照组 (0.12±0.05) 和IL-23组 (0.10±0.00) (F=80.51,P=0.003) 。IL-2组T细胞上清中IFN-γ的含量[ (13 124.67±107.73) μg/L]高于IL-23组[ (3953.67±117.34) μg/L] (t=169.61,P=0.000),而IL-17的含量[ (588.67±77.43) μg/L]低于IL-23组[ (5038.33±88.00) μg/L] (t=-361.71,P=0.000) 。流式细胞仪检测结果显示,IL-23组中分泌IL-17的γδT细胞的比例为 (9.93±0.55) %,高于IL-2组的 (3.23±0.28) % (t=-33.18,P=0.001) 。IL-2组和IL-23组小鼠在过继性转移免疫后第3天均未出现炎症反应,在第14天时两组小鼠炎症反应最重,IL-23组可见大量炎症细胞浸润、视网膜出血和视网膜脱离,明显重于IL-2组。
结论IL-23对抗原特异性T细胞向Th17细胞分化具有促进作用,其中Th17细胞又以γδT细胞为主,而IL-2对其却具有抑制作用。进一步的研究证实,IRBP特异性Th17细胞的致病性明显高于Th1细胞。 (中华眼科杂志,2013,49:224-229)