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研究促自噬剂AZD8055对U87细胞株起始细胞Notch通路相关蛋白的表达和成球能力的影响。
方法应用免疫磁珠法分选获得U87细胞株CD133阳性的胶质瘤起始细胞(GICs)。采用免疫荧光染色技术鉴定GICs细胞球干性标志物CD133和Nestin，以及自噬相关蛋白LC3B和p62的表达。以CCK8检测AZD8055对U87起始细胞存活率的影响。采用Western blot检测AZD8055不同浓度处理组Notch 1、Notch胞内域、Hes1、p62、LC3B蛋白的表达。通过单细胞成球实验观察AZD8055对GICs成球能力的影响。
结果免疫荧光染色结果显示，GICs细胞球中CD133和Nestin呈阳性表达。CCK8检测结果提示，随着AZD8055浓度的增高，U87起始细胞的存活率逐渐降低。Western blot结果提示，与溶媒对照组相比，随着AZD8055浓度的升高，药物处理组的自噬水平增高，而Notch1通路相关蛋白的表达降低，且各浓度组之间的蛋白表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫荧光染色结果提示，经AZD8055处理后U87起始细胞的LC3B表达明显升高，p62表达降低。单细胞成球实验显示，随着AZD8055药物浓度的增高，各组成球数目和细胞球体积递减，且差异有统计学意义(均P<0.05)，说明U87 GICs的成球能力降低。
结论AZD8055通过诱发自噬抑制了Notch通路相关蛋白的表达，并且AZD8055能够抑制U87 GICs的成球能力。