【摘 要】
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目的:利用Seahorse XFp体外细胞能量代谢分析系统探讨延胡索乙素(THP)对人肝癌(HCC)SMMC-7721细胞能量代谢的影响.方法:不同浓度的THP作用SMMC-7721细胞后,CCK-8法检测THP对S
【机 构】
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长春中医药大学,长春130117;中国科学院长春应用化学研究所,长春130022
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目的:利用Seahorse XFp体外细胞能量代谢分析系统探讨延胡索乙素(THP)对人肝癌(HCC)SMMC-7721细胞能量代谢的影响.方法:不同浓度的THP作用SMMC-7721细胞后,CCK-8法检测THP对SMMC-7721细胞增殖的影响;采用Seahorse XFp细胞能量代谢分析系统检测THP对SMMC-7721细胞线粒体呼吸和糖酵解的影响;优化Seahorse XFp细胞能量代谢分析系统检测SMMC-7721细胞线粒体压力(OCR)和糖酵解条件;流式细胞术检测THP诱导SMMC-7721细胞的凋亡率及细胞周期;Western blot检测SMMC-7721细胞中caspase-3、caspase-9及cytochrome c蛋白的表达差异.结果:THP处理后的SMMC-7721细胞增殖明显受到抑制,且具有时间和剂量效应关系;OCR最优条件为:葡糖糖浓度2.5 mol/L、谷氨酰胺0.2 mol/L、丙酮酸钠0.1 mol/L,寡霉素1μmol/L、FCCP 1 μmol/L、鱼藤酮0.5 μmol/L;ECAR最优条件为:葡糖糖10 mmol/L、寡霉素10 μmol/L、2-DG 50 mmol/L.THP(150 μg/ml)作用SMMC-7721细胞24 h后,线粒体呼吸作用被抑制,线粒体基础呼吸、ATP产量及最大呼吸能力均下降;同时抑制糖酵解作用,糖酵解能力、最大糖酵解能力及糖酵解储备均下降;流式细胞术结果显示细胞凋亡率升高,G1期细胞增多,且阻滞在G1期;同时,caspase-9及cytochrome c蛋白表达水平显著升高,形成凋亡小体上调caspase-3表达.结论:THP显著抑制人HCC细胞SMMC-7721的线粒体呼吸和糖酵解作用,延缓细胞周期进程,诱导线粒体途径的细胞凋亡.
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