【摘 要】
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[背景]YycFG双组分系统是肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)应对外界环境的重要信息传递系统,其中表达反应调节子YycF的编码基因是肺炎链球菌生长的必需基因,但其是
【机 构】
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重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室 重庆400016重庆医科大学附属儿童医院检验科 重庆400014;
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[背景]YycFG双组分系统是肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)应对外界环境的重要信息传递系统,其中表达反应调节子YycF的编码基因是肺炎链球菌生长的必需基因,但其是否调控细菌毒力尚不清楚.[目的]构建肺炎链球菌pcsB组成型表达及yycF缺陷菌,分析YycF对肺炎链球菌生物学特征和毒力的影响.[方法]采用Janus cassette (JC)反选的方法构建pcsB组成型表达菌株(Pc-PcsB+),从该菌株出发用替代失活的方法构建yycF缺陷菌株(Pc-PcsB+ ΔyycF),比较野生株D39rpsl41、pcsB组成型表达株及yycF缺陷株的生长特性、荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)含量、粘附侵袭能力和致病性的差异.[结果]成功构建pcsB组成型表达的yycF缺陷菌株(Pc-PcsB+ ΔyycF);yycF缺陷导致细菌生长缓慢、分裂异常、胞内荚膜多糖和小分子荚膜多糖增多;体外实验结果显示,yycF缺陷菌株粘附能力较Pc-PcsB+菌株减弱(P=0.006).体内毒力实验显示,感染野生菌的小鼠全部死亡,感染Pc-PcsB+和Pc-PcsB+ΔyycF菌株的小鼠死亡率分别为91.7％、75％,二者没有统计学差异(P=0.183),但Pc-PcsB+ ΔyycF菌株感染组有降低趋势;定殖结果显示,yycF缺陷菌株感染组的肺匀浆菌载量显著低于对照组(P=0.033).[结论]成功构建yycF缺陷菌株,并初步证明ycF基因会影响肺炎链球菌的生物性状和致病能力,为后续探讨YycFG双组分系统对肺炎链球菌致病能力调控机制的研究奠定了基础.
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