【摘 要】
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目的构建瑞替普酶(r-PA)融合蛋白的原核表达体系,并研究DsbA、DsbC、pKJE7、pGro7、pTf16等分子伴侣对其复性的影响。方法将r-PA基因克隆到表达载体质粒PET-32a中,通过异丙基
【机 构】
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安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室,安徽安科生物工程集团股份有限公司
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目的构建瑞替普酶(r-PA)融合蛋白的原核表达体系,并研究DsbA、DsbC、pKJE7、pGro7、pTf16等分子伴侣对其复性的影响。方法将r-PA基因克隆到表达载体质粒PET-32a中,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在宿主菌E.coli BL21中进行表达。在复性时分别添加不同分子伴侣,研究不同分子伴侣对融合蛋白体外复性的影响。结果SDS-PAGE和Western blot结果表明r-PA融合蛋白正确表达,分子伴侣DsbA、pKJE7、pTf16对融合蛋白的复性有明显效果,体外溶圈实验表明复性后的r-PA具有纤溶活性。结论分子伴侣能有效帮助r-PA融合蛋白的复性。
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目的构建瑞替普酶r-PA融合蛋白的原核表达体系，并研究DsbA、DsbC、pKJE7、pGro7、pTf16等分子伴侣对其复性的影响。方法：将r-PA基因克隆到表达载体质粒PET-32a中，经PCR及EcoR I