论文部分内容阅读
目的 探讨建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测解脲脲屏体(Uu)的可行性及价值。方法 根据Uu UreA基因序列设计合成引物和自身淬灭引物,采用基因克隆技术,将UreA基因片段插入到载体pMD18-T,以此作为标准品。优化PCR条件,建立以自身淬灭引物技术为平台的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,并对所建立的方法进行初步方法学评价。结果 成功构建了重组质粒pMD18-T-UreA;建立了以自身淬灭探针技术为基础的实时荧光定量PCR方法,其线性检测范围为10^1~10^9copies/μl;灵