【摘 要】
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目的 探讨采用含淤胆血清的培养体系直接从体外全骨髓细胞培养中筛选、扩增和分化骨髓源性肝干细胞的可行性.方法 制备含不同浓度淤胆血清的条件筛选培养液,常规培养大鼠全骨髓细胞,贴壁后换用条件筛选培养液,根据筛选的结果确定最佳的淤胆血清浓度.筛选到的骨髓源性肝干细胞分别采用扩增培养液和分化培养液进行扩增和诱导分化.传代细胞应用流式细胞仪检测干细胞标记.采用免疫组织化学、RT-PCR和电镜等方法对骨髓源性
【机 构】
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528000,中山大学附属佛山医院,佛山市第一人民医院,肝胆外科,510120,广州,中山大学附属第二医院肝胆外科,528000,中山大学附属佛山医院,佛山市第一人民医院,肝胆外科,528000,中山
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目的 探讨采用含淤胆血清的培养体系直接从体外全骨髓细胞培养中筛选、扩增和分化骨髓源性肝干细胞的可行性.方法 制备含不同浓度淤胆血清的条件筛选培养液,常规培养大鼠全骨髓细胞,贴壁后换用条件筛选培养液,根据筛选的结果确定最佳的淤胆血清浓度.筛选到的骨髓源性肝干细胞分别采用扩增培养液和分化培养液进行扩增和诱导分化.传代细胞应用流式细胞仪检测干细胞标记.采用免疫组织化学、RT-PCR和电镜等方法对骨髓源性肝干细胞进行形态学以及表型特征的鉴定.以糖原染色和尿素分析的方法对诱导分化的细胞进行代谢功能的测定.结果 筛选培养结果,含50 ml/L的淤胆血清培养液的筛选效果最佳:骨髓源性肝干细胞能够生存,而其他非肝干细胞因不能适应而凋亡.纯化的肝干细胞能在扩增培养体系中传代6代并且维持稳定的细胞表面特征.更换为分化培养体系后,可形成肝细胞样集落形成单位.肝细胞样集落形成单位的细胞表达胎肝细胞的标志(AFP,白蛋白和细胞角蛋白8/18),胆管细胞的标志(细胞角蛋白19),肝细胞的功能蛋白(甲状腺素转运蛋白和细胞色素P450-2 b1),以及肝细胞核因子(HNF-1α和HNF-3 β).同时具有糖原储存和尿素合成等肝细胞特有功能.结论 含淤胆血清的筛选培养液能从全骨髓细胞培养中有效地筛选骨髓源性肝干细胞,并且纯化的肝干细胞能传代6代.肝干细胞分化后能形成具有肝细胞样的表型和功能.骨髓源性肝干细胞为解决临床肝细胞治疗的肝细胞来源问题提供了一个新的方法。
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由中华医学会外科学分会脾功能与脾外科学组及〈中华创伤杂志〉、〈肝胆外科杂志〉编辑部联合主办,哈尔滨医科大学附属第一医院和安徽医科大学附属第一医院承办的＂2010国际腹部创伤暨第十届全国脾脏外科学术研讨会＂于2010年6月4～6日在合肥市召开.来自国际、国内的30余位著名专家应邀出席会议.美国Roger A.Orsini教授、俄罗斯Dubinkin Vladimir教授、日本Takashi Taji
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肝脏手术技术的世界史至今已超过百年,在中国国内则起步于上个世纪50年代,开始是对肝脏解剖和术后代谢规律的研究,其后发展了许多肝脏切除技术,包括各种肝脏血流阻断技术、肝叶肝段切除技术、肝脏肿瘤局部切除技术、肝脏移植技术等.至今,肝脏外科手术技术已经形成完整的理论体系,规范化治疗的雏形业已初步形成。
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自1989年澳大利亚Strong等[1,2]成功开展首例小儿活体肝移植,1993年日本Ichida等成功开展首例成人活体肝移植以来,随着尸体肝移植供体缺乏,以及活体肝移植供体评估、移植物切取和血管、胆管吻合重建技术的不断提高,活体肝移植例数逐痧年增加,大大缓解了尸体肝移植供体严重不足,挽救了许多终末期肝病病人的生命。
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