【摘 要】
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目的:探讨人脐带间质干细胞来源的外泌体（mesenchymal stem cell derived exosomes, MSC-Ex）对肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cell, LSEC）毛细血管样改变的影响。方法:从人脐带组织中分离培养间质干细胞，采用超速离心法提取培养上清液中的MSC-Ex。采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析仪以及蛋白质免疫印迹对MSC-E
【基金项目】
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江苏省社会发展重点研发计划项目（BE2020775）； 江苏省研究生科研创新计划（KYCX20＿3091）； 镇江市社会发展重点研发计划项目（SH2020002）；
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目的:探讨人脐带间质干细胞来源的外泌体（mesenchymal stem cell derived exosomes, MSC-Ex）对肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cell, LSEC）毛细血管样改变的影响。方法:从人脐带组织中分离培养间质干细胞，采用超速离心法提取培养上清液中的MSC-Ex。采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析仪以及蛋白质免疫印迹对MSC-Ex进行形态和表征的鉴定。用TNF-α诱导建立LSEC血管化模型，并加入DIO荧光染料标记的MSC-Ex共培养，观察LSEC对MSC-Ex的摄取能力。采用qRT-PCR检测LSEC中促血管生成素-2（angiopoietin-2,Ang-2）、CD34的mRNA相对表达，采用蛋白质免疫印迹检测LSEC中Ang-2、CD34蛋白表达，采用小管形成实验检测LSEC的管腔形成能力。构建蛋氨酸、胆碱缺乏饮食（methionine and choline deficiency diet, MCD）诱导的ICR小鼠肝纤维化模型，然后尾静脉分别注射MSC-Ex（10 mg/kg）和100μL PBS,每3 d注射1次，共注射5次。采用天狼猩红染色及免疫组织化学染色分别观察肝组织胶原沉积及检测Ang-2蛋白表达。结果:蛋白质免疫印迹显示MSC-Ex高表达外泌体特征性标志物Alix、TSG101、CD63、CD9,透射电镜显示MSC-Ex为直径约100 nm的盘状囊泡，纳米颗粒跟踪分析仪显示其颗粒浓度约为3.4×1011/mL。MSC-Ex可被LSEC摄取，并显著抑制TNF-α诱导的LSEC的管腔形成及Ang-2、血管内皮细胞标志CD34表达。天狼猩红染色和免疫组织化学染色显示，MSC-Ex可限制纤维化肝组织的胶原沉积和Ang-2蛋白表达。结论:人脐带MSC-Ex可在体内外抑制LSEC毛细血管样改变。
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