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目的
探索肿瘤特异性免疫细胞杀伤骨肉瘤的实现方法，并分析使用过继性细胞输注免疫治疗对骨肉瘤产生的治疗效果。
方法使用地西他滨（Decitabine，DAC）作为去甲基化药物对HOS及U2OS骨肉瘤细胞系进行治疗，采用PCR及Western Blot检测治疗后肿瘤-睾丸抗原（cancer-testis antigen，CTA）的表达情况。在动物实验中，使用转染了萤火虫荧光素酶和HLA-A0201的人源肿瘤细胞系HOS在免疫缺陷NOD-SCID小鼠上成瘤，并使用DiR染色标记体外培养扩增的CTA特异性对应HLA人源CD8+ T细胞输注，通过小动物活体成像系统检测T细胞在小鼠体内的分布，同时监测治疗过程中小鼠瘤块的生长情况。使用鼠源骨肉瘤细胞系K7M2在免疫健全鼠BALB/c成瘤，进行去甲基化，使用流式细胞仪分析治疗前后肿瘤块内淋巴细胞的比例、数量以及CD8+ T细胞的活化情况，判断去甲基化对自体淋巴细胞浸润、活化的作用。
结果使用DAC对骨肉瘤细胞系HOS及U2OS进行去甲基化后，所有被检测的CTA表达均不同程度的提高。在体外培养的骨肉瘤细胞经过至少5 d的DAC治疗后能被CTA特异性CD8+ T细胞显著杀伤，DAC本身对骨肉瘤细胞系生长可产生抑制作用。在免疫缺陷动物模型中，经过DAC去甲基化预治疗的荷瘤小鼠能观测到明显的CTA特异性T细胞向肿瘤组织归巢现象，同时，去甲基化预治疗联合CTA特异性T细胞输注治疗显著抑制了骨肉瘤移植瘤的生长。在免疫健全鼠肿瘤模型中，去甲基化能促进自体T细胞向肿瘤组织的归巢，并提高肿瘤内CD8+ T细胞的活性及其分泌的干扰素γ、颗粒酶B、穿孔素水平。
结论去甲基化能在抑制骨肉瘤细胞生长的同时，提高骨肉瘤细胞的CTA表达，为以CTA为靶点的特异性细胞免疫输注治疗提供条件。