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摘 要：本文主要利用薄层色谱法来对口服溶液中具有的黄连、石斛物质进行了检测；利用RP-HPLC法将盐酸小檗碱当作主要指标对其含量进行了详细的检测。无论是对定性还是对定量的检测使用的方法都较为简单，操作方便，并且在制剂的质量控制方面可以得到广泛的使用。
关键词：石斛碱；RP-HPLC法；薄层色谱法
所谓清热解读口服液，主要是由黄连、石斛等多种中药共同组成。本文笔者依据多年经验，对该口服液里面含有的黄连、石斛这两种重要采取薄层色谱的方法进行了分别试验，并且还使用了RP-HPLC法对该制剂里面含有的盐酸小檗碱进行了检测，并建立相应的控制标准。
1 薄层色谱法定性鉴别
1.1 石斛的鉴别
实验人员需要通过精密的称量提取10ml的口服液，然后放入到一个为60ml的分液漏斗中对液体进行分离，这个时候需要添加4次的氯仿进行萃取，无论哪一次都需要控制在10ml的范围。当实验人员将萃取液进行合并以后，通过浓缩的方式得到1ml的剂量当作相应的供试液。紧接着实验人员需要另外提取該口服液里面存在的阴性样品经过加工得到相应的阴性对照液。不仅仅如此，需要将1mg/ml的石斛碱具有的氯仿溶液当作相应的对照品溶液。这个时候采取薄层色谱法进行试验，分别提取的溶液含量为10μm，然后再滴入到相同的薄层板上面，这个时候将笨-氯仿-甲醇（15：10：1）当作相应的展开剂，在经过蒸汽充分饱和的情况下进行展开，当展开的距离在15cm的时候提取出来，并做好晒干处理。接着另外提取已经改良成功的碘化秘钾试剂显色，并且会和对照品色谱位置的上面呈现出一样的斑点。所获得的结果请看图1所示。
1.2 黄连的鉴别
实验人员取鉴别石斛项下面的供试品液当作相应的供试液，然后另外提取该口服液当中的阴性样品加工成相应的阴性对照液，并且还需要将相关的甲醇溶液当作对照品溶液。这个时候实验人员就需要利用薄层色谱法进行（同前）进行试验。实验人员会依据上述的方法提取三种溶液，分别提取的溶液含量为10μm，然后再滴入到相同的薄层板上面，这个时候将正丁醇-醋酸-水（7：1：2）当作相应的展开剂，当展开的距离在15cm的时候提取出来，并做好晒干处理。等到完全晒干以后，实验人员再将其放置到紫外灯（365nm）的距离下进行观察，这个时候就可以看到图2A。接着，实验人员将苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水（6：3：1.5：1.5：0.5）当作相应的展开剂，当经过相关设备充分作用下展开的距离在15cm的时候提取出来，并做好晒干处理。等到完全晒干以后，实验人员再将其放置到紫外灯（365nm）的距离下进行观察，这个时候就可以看到图2B。
2 制剂中盐酸小案碱的含量测定
2.1 色谱条
色谱柱ZebaxODS-C18（4.6mmIDX250mm）；流动相：0.02mol/L，磷酸二氢钾溶液-乙睛（60：40）用磷酸调节pH为2.3；流速：1.oml/min；检测波长：346nm[，〕；进样量：10“l；灵敏度：0.005AUFS；最小检出量：1.2μg/ml。
2.2 供试品溶液的制备
取本品10ml置分液漏斗中，加氨水调节pH10.0，振摇，用水饱和的正丁醇50ml，分5次萃取（每次l0ml）。合并萃取液，水浴蒸去正丁醇后，残留物用甲醇溶解。溶液转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液。另取缺黄连的口服液样品10ml，照供试品溶液制备方法同法操作，作为缺黄连的阴性对照溶液。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品17.smg；置10oml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。
2.4 专属性试脸
分别吸取供试品溶液、缺黄连阴性对照溶液及对照品溶液10μl，按以上色谱条件分别进样测定，结果，盐酸小粟碱对照品的保留时间为9.8min，缺黄连阴性对照溶液在该时间无色谱峰出现，而供试品溶液在该保留时间有特征吸收峰。当在供试品溶液中加入盐酸小巢碱对照品后测定，仅发现峰增高，峰面积增大，而未发生分裂，可以确定该峰即为该制剂中盐酸小粟碱的特征峰，其它成分对测定无干扰。
2.5 标准曲线的制备
精密吸取盐酸小桨碱对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，10.0ml，分别置10ml量瓶中，用甲醇定容。分别进样10μl，测定吸收峰面积。以浓度为横座标，峰面积为纵座标绘制标准曲线。实验表明，盐酸小粱碱对照品在17.8一178μg/ml的浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系，实验数据经直线回归，得回归方程为A=-8437.4+7530.8C，相关系数r=0.99987（n=5）。
2.6 精密度试验
同一份供试品溶液，重复进样5次，测定其峰面积、结果表明，精密度良好，RSD=1.6%。
2.7 重现性试验
取同一批号的口服液样品5份。每份10ml，按供试品溶液制备项下制备，分别进样，依法测定。结果表明，本法重现性良好，RSD=2.76%。
2.8 稳定性试脸
取供试品熔液2份，每隔2h各测一次；每份测3次（n=6），峰面积积分值的RSD=2.25%。结果表明，测得数据在4h内稳定。
3 讨论
本文实验人员主要对清热解毒口服液里面含有的石斛及其黄连分别进行了详细的检测，并且将其所存在的阴性对照液进行了对比，得到的结果并没有受到不利影响，该试验有着较强的专属性，并且灵敏度也比较高。显而易见的是，实验人员对盐酸小檗碱的实际含量进行了检测，依据相关文献可以得知：一些实验人员曾经使用了UV-2100类型的紫外分光光度计对其含量进行了检测，并依据正交函数及其相关导数法做好恰当的处理，关于小檗碱的HPLC测量方法也存在相关报道，然而因为干扰组成因素存在一定的差异性，所以无法使用到含量检测中。在实验的领域中探索了一些满足该制剂色谱条件的一些方法。对于小檗碱的特点来说，存在着较高的专属特点，并且在制剂中不会受到其他成分带来的影响，并且操作较为简便，并且不需要上柱进行分离。所以，该方法应用到小檗碱含量检查中较为合适。
参考文献
[1]张程，宋雪慧，于博，包玉敏，张力.分光光度法测定黄瓜籽粉中盐酸小檗碱的含量[J].光谱实验室，2010（03）.
[2]邓放，刘圆，刘超，孟庆艳，高泽文.反相高效液相色谱法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量[J].时珍国医国药，2006（10）.
[3]伍兆锋，温敏杰，赖越元，夏金堂，蔡文松，徐波，李书华.盐酸小檗碱对血管平滑肌细胞增殖的干预研究[J].广州医学院学报，2013（04）.
[4]康馨元，任伯颖，曲朋，张辉，孙佳明.高效液相色谱法测定左金胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].吉林中医药，2014（05）.
关键词：石斛碱；RP-HPLC法；薄层色谱法
所谓清热解读口服液，主要是由黄连、石斛等多种中药共同组成。本文笔者依据多年经验，对该口服液里面含有的黄连、石斛这两种重要采取薄层色谱的方法进行了分别试验，并且还使用了RP-HPLC法对该制剂里面含有的盐酸小檗碱进行了检测，并建立相应的控制标准。
1 薄层色谱法定性鉴别
1.1 石斛的鉴别
实验人员需要通过精密的称量提取10ml的口服液，然后放入到一个为60ml的分液漏斗中对液体进行分离，这个时候需要添加4次的氯仿进行萃取，无论哪一次都需要控制在10ml的范围。当实验人员将萃取液进行合并以后，通过浓缩的方式得到1ml的剂量当作相应的供试液。紧接着实验人员需要另外提取該口服液里面存在的阴性样品经过加工得到相应的阴性对照液。不仅仅如此，需要将1mg/ml的石斛碱具有的氯仿溶液当作相应的对照品溶液。这个时候采取薄层色谱法进行试验，分别提取的溶液含量为10μm，然后再滴入到相同的薄层板上面，这个时候将笨-氯仿-甲醇（15：10：1）当作相应的展开剂，在经过蒸汽充分饱和的情况下进行展开，当展开的距离在15cm的时候提取出来，并做好晒干处理。接着另外提取已经改良成功的碘化秘钾试剂显色，并且会和对照品色谱位置的上面呈现出一样的斑点。所获得的结果请看图1所示。
1.2 黄连的鉴别
实验人员取鉴别石斛项下面的供试品液当作相应的供试液，然后另外提取该口服液当中的阴性样品加工成相应的阴性对照液，并且还需要将相关的甲醇溶液当作对照品溶液。这个时候实验人员就需要利用薄层色谱法进行（同前）进行试验。实验人员会依据上述的方法提取三种溶液，分别提取的溶液含量为10μm，然后再滴入到相同的薄层板上面，这个时候将正丁醇-醋酸-水（7：1：2）当作相应的展开剂，当展开的距离在15cm的时候提取出来，并做好晒干处理。等到完全晒干以后，实验人员再将其放置到紫外灯（365nm）的距离下进行观察，这个时候就可以看到图2A。接着，实验人员将苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水（6：3：1.5：1.5：0.5）当作相应的展开剂，当经过相关设备充分作用下展开的距离在15cm的时候提取出来，并做好晒干处理。等到完全晒干以后，实验人员再将其放置到紫外灯（365nm）的距离下进行观察，这个时候就可以看到图2B。
2 制剂中盐酸小案碱的含量测定
2.1 色谱条
色谱柱ZebaxODS-C18（4.6mmIDX250mm）；流动相：0.02mol/L，磷酸二氢钾溶液-乙睛（60：40）用磷酸调节pH为2.3；流速：1.oml/min；检测波长：346nm[，〕；进样量：10“l；灵敏度：0.005AUFS；最小检出量：1.2μg/ml。
2.2 供试品溶液的制备
取本品10ml置分液漏斗中，加氨水调节pH10.0，振摇，用水饱和的正丁醇50ml，分5次萃取（每次l0ml）。合并萃取液，水浴蒸去正丁醇后，残留物用甲醇溶解。溶液转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液。另取缺黄连的口服液样品10ml，照供试品溶液制备方法同法操作，作为缺黄连的阴性对照溶液。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品17.smg；置10oml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。
2.4 专属性试脸
分别吸取供试品溶液、缺黄连阴性对照溶液及对照品溶液10μl，按以上色谱条件分别进样测定，结果，盐酸小粟碱对照品的保留时间为9.8min，缺黄连阴性对照溶液在该时间无色谱峰出现，而供试品溶液在该保留时间有特征吸收峰。当在供试品溶液中加入盐酸小巢碱对照品后测定，仅发现峰增高，峰面积增大，而未发生分裂，可以确定该峰即为该制剂中盐酸小粟碱的特征峰，其它成分对测定无干扰。
2.5 标准曲线的制备
精密吸取盐酸小桨碱对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，10.0ml，分别置10ml量瓶中，用甲醇定容。分别进样10μl，测定吸收峰面积。以浓度为横座标，峰面积为纵座标绘制标准曲线。实验表明，盐酸小粱碱对照品在17.8一178μg/ml的浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系，实验数据经直线回归，得回归方程为A=-8437.4+7530.8C，相关系数r=0.99987（n=5）。
2.6 精密度试验
同一份供试品溶液，重复进样5次，测定其峰面积、结果表明，精密度良好，RSD=1.6%。
2.7 重现性试验
取同一批号的口服液样品5份。每份10ml，按供试品溶液制备项下制备，分别进样，依法测定。结果表明，本法重现性良好，RSD=2.76%。
2.8 稳定性试脸
取供试品熔液2份，每隔2h各测一次；每份测3次（n=6），峰面积积分值的RSD=2.25%。结果表明，测得数据在4h内稳定。
3 讨论
本文实验人员主要对清热解毒口服液里面含有的石斛及其黄连分别进行了详细的检测，并且将其所存在的阴性对照液进行了对比，得到的结果并没有受到不利影响，该试验有着较强的专属性，并且灵敏度也比较高。显而易见的是，实验人员对盐酸小檗碱的实际含量进行了检测，依据相关文献可以得知：一些实验人员曾经使用了UV-2100类型的紫外分光光度计对其含量进行了检测，并依据正交函数及其相关导数法做好恰当的处理，关于小檗碱的HPLC测量方法也存在相关报道，然而因为干扰组成因素存在一定的差异性，所以无法使用到含量检测中。在实验的领域中探索了一些满足该制剂色谱条件的一些方法。对于小檗碱的特点来说，存在着较高的专属特点，并且在制剂中不会受到其他成分带来的影响，并且操作较为简便，并且不需要上柱进行分离。所以，该方法应用到小檗碱含量检查中较为合适。
参考文献
[1]张程，宋雪慧，于博，包玉敏，张力.分光光度法测定黄瓜籽粉中盐酸小檗碱的含量[J].光谱实验室，2010（03）.
[2]邓放，刘圆，刘超，孟庆艳，高泽文.反相高效液相色谱法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量[J].时珍国医国药，2006（10）.
[3]伍兆锋，温敏杰，赖越元，夏金堂，蔡文松，徐波，李书华.盐酸小檗碱对血管平滑肌细胞增殖的干预研究[J].广州医学院学报，2013（04）.
[4]康馨元，任伯颖，曲朋，张辉，孙佳明.高效液相色谱法测定左金胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].吉林中医药，2014（05）.