氧环境对成骨细胞活性的影响

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目的

对比观察缺氧及缺氧再复氧环境下新生大鼠成骨细胞的细胞活性、凋亡率及基因表达的变化。

方法

取48 h内新生SD大鼠的颅骨,组织块法培养和纯化成骨细胞,采用茜素红染色、碱性磷酸酶染色行细胞形态学鉴定。以正常培养成骨细胞36 h为对照组(A组);取第3代成骨细胞,分别于缺氧24 h(B组)、缺氧36 h(C组)、缺氧24 h再复氧12 h(D组)培养后,采用MTT法检测细胞活性、流式细胞技术检测细胞凋亡率;采用实时定量聚合酶链反应和免疫印迹技术检测下游基因胶原(COL)Ⅰ、骨形态发生蛋白(BMP)-2、核心结合因子(RUNX)-2、转化生长因子(TGF)β1 mRNA表达和相关蛋白的变化。

结果

缺氧及缺氧复氧环境下,成骨细胞活性降低,A组为(99.1%±8.3%),B组为(90.9%±9.4%),C组(79.9%±8.7%),D组为(73.0%±8.2%),D组<C组<B组<A组(F=37.886,P=0.000);细胞凋亡率增加,A组为(1.9%±1.3%),B组为(16.3%±2.5%),C组(28.2%±4.2%),D组为(33.5%±3.6%),D组>C组>B组>A组(F=26.198,P=0.000);BMP-2、RUNX-2、Collagen type Ⅰ、TGF-β1 mRNA表达量降低,且D组<C组<B组<A组(F=13.082, P=0.006; F=7.088, P=0.017; F=6.857, P=0.038; F=51.368, P=0.000);BMP-2、RUNX-2、Collagen type Ⅰ、TGF-β1蛋白表达量降低,且D组<C组<B组<A组(F=8.114, P=0.013; F=28.935, P=0.000; F=9.857, P=0.007; F=46.541, P=0.000)。

结论

缺氧及缺氧再复氧环境会降低成骨细胞活性,增加细胞凋亡率,下调相关基因的表达。缺氧再复氧环境会加重缺氧状态下成骨细胞损伤。

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