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摘要：比较14个杏鲍菇菌株的菌丝生长速度、产量、农艺性状、拮抗性和酯酶同工酶酶谱，结果表明，14个菌株间存在遗传差异，大致可以分为5大类群，菌株P14、P2、P1、P6、P7、P8和P4为第1类群，菌株P11为第2类群，菌株P13、P10、P5为第3类群，菌株P12和P3为第4类群，菌株P9为第5类群；拮抗试验和同工酶试验结果基本吻合。
关键词：桑枝；杏鲍菇；生物学特性；遗传差异；同工酶
中图分类号： S646.01 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2015）03-0231-03
食用菌产业是浙江省十大特色优势产业之一，也是杭州市新兴发展的一个朝阳产业。近年来，杭州市珍稀食用菌产业呈现稳定快速发展态势，已成为杭州都市农业发展新的亮点。珍稀食用菌杏鲍菇是一种品质极佳的大型肉质伞菌，营养价值高、菇肉肥厚、质地脆嫩，具有淡淡的杏仁香味，保质期长，深受广大消费者喜爱，产品在市场上供不应求，且价格基本稳定在16～20元/kg，比普通平菇等高出4～5倍，商品价值高。目前，杏鲍菇在杭州建德、淳安、临安等地有规模种植，年栽培达200多万袋，并呈逐年扩大的趋势。当前，杭州市种植杏鲍菇主要存在的问题有：一是杏鲍菇品种混杂，由于品系不清，菇农每年都需要反复引种、试种，不敢大面积栽培，经常耽误生产季节；二是栽培管理存在不足，造成产品质量参差不齐，影响生产效益。笔者通过引进各地杏鲍菇优良菌株，采用桑枝立体栽培方法进行品比试验，研究菌株的遗传差异，以获得适宜本地栽培的杏鲍菇菌株，为杭州地区桑枝杏鲍菇栽培提供有益帮助。
1 材料与方法
1.1 试验材料
14个杏鲍菇菌株，从国内有代表性的科研单位和基地引进。
1.2 培养基
母种培养基（马铃薯综合培养基）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，蛋白胨5 g，酵母膏1 g，水1 000 mL，pH值为5.5；原种培养基：棉籽壳78%，麸皮20%，石灰1%，石膏1%；栽培料配方：桑枝17%，木屑20%，棉籽壳37%，麸皮24%，糖1%，轻质CaCO3 1%，含水量65%。
1.3 杏鲍菇不同菌株菌丝的长势试验
每个杏鲍菇菌株接种5个750 mL玻璃瓶，培养基配方为原种培养基，每瓶含干料300 g；从同步培养的杏鲍菇母种中取约3 cm×2 cm的菌塊接种于玻璃瓶中央，置于26 ℃培养箱内恒温培养[1]；当菌丝铺满整个瓶面时开始测量，定期记录，当有菌株菌丝长满玻璃瓶时，试验结束。通过记录菌丝生长的长度和时间，计算菌丝生长速度，同时观察菌丝形态及其长势。
1.4 杏鲍菇不同菌株出菇试验
1.4.1 菌包制作 采用用菌棒式栽培，每袋干料为0.5 kg，每个配方100棒。将培养料装到袋内，松紧适度；装料后用线扎实，在火焰上熔封；用特制打孔器，在塑料袋的一侧等距离打4个孔，洞径1.5 cm，孔深2 cm，用胶布贴在接种孔上[2]。
1.4.2 菌包消毒与接种 采用高压灭菌锅进行灭菌，料袋分层放置，保持压力0.15 MPa，121 ℃、灭菌2 h。接种前进行消毒处理，料温降至30 ℃时，将袋料及杏鲍菇原种放入接种室内，无菌接种台采用紫外线进行消毒杀菌；接种时揭开胶布一角，从原种瓶中取1勺原种培入穴中，贴好胶布。
1.4.3 菌丝培养 接种后，在培养室将菌袋袋口朝同一方向横放上堆，堆高6～8层；培养室在堆放菌袋前采用石灰进行卫生消毒杀菌，堆放菌袋后培养室温度控制在26～28 ℃，空气相对湿度控制在65%～70%，培养环境基本黑暗，加强通风管理；培养室培养30 d左右，接种后1周检查1次，及时剔除被污染的栽培袋，观察记录菌丝长势。
1.4.4 出菇管理 菌袋袋口朝上竖排放在床架上，将菌袋上胶布撕下作为出菇口，温度控制在15～18 ℃为宜，当原基出现并达4～5 cm时，菇棚内相对湿度控制在80%～90%为宜，不能直接向子实体喷水。
1.4.5 采收与记录 当杏鲍菇子实体成熟、菌盖卷边未平展时即可采收，出菇后分潮次对产量进行记录，并对杏鲍菇子实体的形态进行观察。
1.5 杏鲍菇不同菌株菌丝的拮抗试验
2个菌种为1组，接种于含母种培养基的培养皿上，25 ℃避光培养10 d。每个处理重复3次，观察各菌株间是否有拮抗反应，是否形成明显的拮抗线。
1.6 杏鲍菇不同菌株酯酶同工酶比较
采用标准NY/T 1097—2006《食用菌菌种真实性鉴定 酯酶同工酶电泳法》中规定的方法[3]进行。
2 结果与分析
2.1 杏鲍菇不同菌株菌丝的长势
根据观察，各杏鲍菇菌株的菌丝生长良好，生长均匀整齐，菌丝洁白。由表1可见，杏鲍菇P5菌丝的生长速度为0505 cm/d，是长势最好的菌株，其生长速度与其他菌株存在一定差异；杏鲍菇P12、P9、P11的菌丝生长速度次之，分别为0.503、0.491、0.491 cm/d；生长相对较慢的菌株是杏鲍菇P13和P4，其菌丝生长速度分别为0.405、0.431 cm/d，长势较差。
2.2 杏鲍菇不同菌株的出菇情况
由表2可见，各菌株间的产量有明显差别，其中，产量最高的菌株为杏鲍菇P14，产量为0.32 kg/棒，按照每棒原料（干料）0.5 kg计算，生物学转化率达到65%；其次为杏鲍菇P3、P12，产量分别为0.31、0.29 kg/棒，产量最低的为杏鲍菇P13，产量为0.18 kg/棒。通过观察，杏鲍菇P13、P1和P2菇型不整齐，有畸形菇出现。从产量来看，P3、P14、P12为优良菌株，可以运用到桑枝栽培杏鲍菇生产中去。
2.3 杏鲍菇不同菌株的农艺性状比较 由表3可见，14个杏鲍菇菌株子实体形状大致分为圆柱状（棍棒形）、近圆柱状（圆锥形）、保龄球状、近保龄球状（鼓形）4类；菌株P9的菌盖直径最小，为3.95 cm，其次是P6、P3，菌株P11菌盖直径最大，为7.88 cm；菌株P9的菌柄最小，为2.86 cm，其次是P1、P10，菌株P7的菌柄最大，为 6.52 cm；菌株P10的菌柄长度最小，为5.08 cm，其次P9、P12，菌株P5的菌柄最长，为10.20 cm。
2.4 杏鲍菇不同菌株间的拮抗试验
由表4、图1可见，在91个试验组中，有拮抗现象的为66组，拮抗现象不明显或无拮抗现象的为25组。
2.5 杏鲍菇不同菌株酯酶同工酶比较
由图2可见，14个菌株具有恒定的谱带数，共检测出18条谱带，Rf 5.5与Rf 5.8是多数菌株共同拥有、活性很强的酶带，可认为其是表达杏鲍菇基本特征的基础酶带；菌株间在酶带活性、数量和Rf值上存在不同程度的差异； 菌株P1、P2和P14的酶带位置相同，只是在着色强度上略有差异；菌株P6、P7、P4与P1等酶带数相同，但是多了Rf 5.0和Rf 1.0特征带；菌株P12比 P3多Rf 2.8酶带；菌株P5、P10和P13酶带位置基本一样，但在Rf 2.7、Rf 3.3、 Rf 3.6这3条酶带上稍有不同；菌株P9和P11相对其他品种而言，酶带明显较少，其中，Rf 0.2是P11的特征酶带。
由图3可见，14个菌株在74%相似水平上可以分为五大类，第1类群为菌株P14、P2、P1、P6、P7、P8和P4，第2類群为菌株P11，第3类群为P13、P10、P5，第4类群为P12和P3，第5类群为P9，其中第1类群所占比例较大，占50%；菌株P14、P2、P1、P6、P7和P8的相似系数为1，结合拮抗反应，说明P14、P2、P1、P6、P7与P8极有可能为同一菌株。
3 结论
试验结果表明，杏鲍菇菌株P5的菌丝生长速度最快，与其他菌株菌丝的生长速度之间存在差异， 其次是杏鲍菇菌株P12、P9、P11， 生长相对最慢的是菌株P13和P4； 各菌株间产量有着明显的差别，其中，产量最高的菌株P14，其次为菌株P3、P12和P11，产量最低的是菌株P13，菌株P13、P1和P2菇型不整齐，出现畸形菇；从产量来看，菌株P3、P14、P12为优良菌株，可以推荐应用到桑枝栽培杏鲍菇生产中去。
拮抗试验是鉴定菌株间遗传差异的传统方法，菌丝之间的拮抗反应是菌株间不同遗传特性的重要表现，可表明不同菌株分属于不同亲和群。从测定结果看，14个杏鲍菇菌株生物学特性表现出一定差异，拮抗现象比较明显。同工酶酶谱可作为鉴定物种，研究分类、进化与变异的重要指标。试验结果表明，杏鲍菇菌株酯酶同工酶酶谱丰富、酶带活性强、带型各异，这说明编码同工酶的基因数量多，有极丰富的遗传多态性。
综合杏鲍菇菌株生物学特性、出菇试验、拮抗试验、同工酶试验结果发现，拮抗试验和同工酶试验结果基本吻合，14个杏鲍菇菌株大致可以分为五大类群。菌株的菌丝生长速度和产量没有表现出各类群特点，这是由于菌丝生长速度和产量易受环境条件和基因显隐性的影响。
参考文献：
[1]姚祥坦，张 敏，徐素琴. 不同桑枝屑配比培养料对杏鲍菇生长及产量影响[J]. 中国食用菌，2009，28（2）：65-66.
[2]黄志龙，肖淑霞，上官舟建. 杏鲍菇优良菌株筛选及配套标准化栽培技术[J]. 食用菌，2008，30（2）：25-27.
[3]黄晨阳，张金霞，陈 强，等. NY/T 1097—2006 食用菌菌种真实性鉴定酯酶同工酶电泳法[S]. 北京：中国标准出版社，2006.
关键词：桑枝；杏鲍菇；生物学特性；遗传差异；同工酶
中图分类号： S646.01 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2015）03-0231-03
食用菌产业是浙江省十大特色优势产业之一，也是杭州市新兴发展的一个朝阳产业。近年来，杭州市珍稀食用菌产业呈现稳定快速发展态势，已成为杭州都市农业发展新的亮点。珍稀食用菌杏鲍菇是一种品质极佳的大型肉质伞菌，营养价值高、菇肉肥厚、质地脆嫩，具有淡淡的杏仁香味，保质期长，深受广大消费者喜爱，产品在市场上供不应求，且价格基本稳定在16～20元/kg，比普通平菇等高出4～5倍，商品价值高。目前，杏鲍菇在杭州建德、淳安、临安等地有规模种植，年栽培达200多万袋，并呈逐年扩大的趋势。当前，杭州市种植杏鲍菇主要存在的问题有：一是杏鲍菇品种混杂，由于品系不清，菇农每年都需要反复引种、试种，不敢大面积栽培，经常耽误生产季节；二是栽培管理存在不足，造成产品质量参差不齐，影响生产效益。笔者通过引进各地杏鲍菇优良菌株，采用桑枝立体栽培方法进行品比试验，研究菌株的遗传差异，以获得适宜本地栽培的杏鲍菇菌株，为杭州地区桑枝杏鲍菇栽培提供有益帮助。
1 材料与方法
1.1 试验材料
14个杏鲍菇菌株，从国内有代表性的科研单位和基地引进。
1.2 培养基
母种培养基（马铃薯综合培养基）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，蛋白胨5 g，酵母膏1 g，水1 000 mL，pH值为5.5；原种培养基：棉籽壳78%，麸皮20%，石灰1%，石膏1%；栽培料配方：桑枝17%，木屑20%，棉籽壳37%，麸皮24%，糖1%，轻质CaCO3 1%，含水量65%。
1.3 杏鲍菇不同菌株菌丝的长势试验
每个杏鲍菇菌株接种5个750 mL玻璃瓶，培养基配方为原种培养基，每瓶含干料300 g；从同步培养的杏鲍菇母种中取约3 cm×2 cm的菌塊接种于玻璃瓶中央，置于26 ℃培养箱内恒温培养[1]；当菌丝铺满整个瓶面时开始测量，定期记录，当有菌株菌丝长满玻璃瓶时，试验结束。通过记录菌丝生长的长度和时间，计算菌丝生长速度，同时观察菌丝形态及其长势。
1.4 杏鲍菇不同菌株出菇试验
1.4.1 菌包制作 采用用菌棒式栽培，每袋干料为0.5 kg，每个配方100棒。将培养料装到袋内，松紧适度；装料后用线扎实，在火焰上熔封；用特制打孔器，在塑料袋的一侧等距离打4个孔，洞径1.5 cm，孔深2 cm，用胶布贴在接种孔上[2]。
1.4.2 菌包消毒与接种 采用高压灭菌锅进行灭菌，料袋分层放置，保持压力0.15 MPa，121 ℃、灭菌2 h。接种前进行消毒处理，料温降至30 ℃时，将袋料及杏鲍菇原种放入接种室内，无菌接种台采用紫外线进行消毒杀菌；接种时揭开胶布一角，从原种瓶中取1勺原种培入穴中，贴好胶布。
1.4.3 菌丝培养 接种后，在培养室将菌袋袋口朝同一方向横放上堆，堆高6～8层；培养室在堆放菌袋前采用石灰进行卫生消毒杀菌，堆放菌袋后培养室温度控制在26～28 ℃，空气相对湿度控制在65%～70%，培养环境基本黑暗，加强通风管理；培养室培养30 d左右，接种后1周检查1次，及时剔除被污染的栽培袋，观察记录菌丝长势。
1.4.4 出菇管理 菌袋袋口朝上竖排放在床架上，将菌袋上胶布撕下作为出菇口，温度控制在15～18 ℃为宜，当原基出现并达4～5 cm时，菇棚内相对湿度控制在80%～90%为宜，不能直接向子实体喷水。
1.4.5 采收与记录 当杏鲍菇子实体成熟、菌盖卷边未平展时即可采收，出菇后分潮次对产量进行记录，并对杏鲍菇子实体的形态进行观察。
1.5 杏鲍菇不同菌株菌丝的拮抗试验
2个菌种为1组，接种于含母种培养基的培养皿上，25 ℃避光培养10 d。每个处理重复3次，观察各菌株间是否有拮抗反应，是否形成明显的拮抗线。
1.6 杏鲍菇不同菌株酯酶同工酶比较
采用标准NY/T 1097—2006《食用菌菌种真实性鉴定 酯酶同工酶电泳法》中规定的方法[3]进行。
2 结果与分析
2.1 杏鲍菇不同菌株菌丝的长势
根据观察，各杏鲍菇菌株的菌丝生长良好，生长均匀整齐，菌丝洁白。由表1可见，杏鲍菇P5菌丝的生长速度为0505 cm/d，是长势最好的菌株，其生长速度与其他菌株存在一定差异；杏鲍菇P12、P9、P11的菌丝生长速度次之，分别为0.503、0.491、0.491 cm/d；生长相对较慢的菌株是杏鲍菇P13和P4，其菌丝生长速度分别为0.405、0.431 cm/d，长势较差。
2.2 杏鲍菇不同菌株的出菇情况
由表2可见，各菌株间的产量有明显差别，其中，产量最高的菌株为杏鲍菇P14，产量为0.32 kg/棒，按照每棒原料（干料）0.5 kg计算，生物学转化率达到65%；其次为杏鲍菇P3、P12，产量分别为0.31、0.29 kg/棒，产量最低的为杏鲍菇P13，产量为0.18 kg/棒。通过观察，杏鲍菇P13、P1和P2菇型不整齐，有畸形菇出现。从产量来看，P3、P14、P12为优良菌株，可以运用到桑枝栽培杏鲍菇生产中去。
2.3 杏鲍菇不同菌株的农艺性状比较 由表3可见，14个杏鲍菇菌株子实体形状大致分为圆柱状（棍棒形）、近圆柱状（圆锥形）、保龄球状、近保龄球状（鼓形）4类；菌株P9的菌盖直径最小，为3.95 cm，其次是P6、P3，菌株P11菌盖直径最大，为7.88 cm；菌株P9的菌柄最小，为2.86 cm，其次是P1、P10，菌株P7的菌柄最大，为 6.52 cm；菌株P10的菌柄长度最小，为5.08 cm，其次P9、P12，菌株P5的菌柄最长，为10.20 cm。
2.4 杏鲍菇不同菌株间的拮抗试验
由表4、图1可见，在91个试验组中，有拮抗现象的为66组，拮抗现象不明显或无拮抗现象的为25组。
2.5 杏鲍菇不同菌株酯酶同工酶比较
由图2可见，14个菌株具有恒定的谱带数，共检测出18条谱带，Rf 5.5与Rf 5.8是多数菌株共同拥有、活性很强的酶带，可认为其是表达杏鲍菇基本特征的基础酶带；菌株间在酶带活性、数量和Rf值上存在不同程度的差异； 菌株P1、P2和P14的酶带位置相同，只是在着色强度上略有差异；菌株P6、P7、P4与P1等酶带数相同，但是多了Rf 5.0和Rf 1.0特征带；菌株P12比 P3多Rf 2.8酶带；菌株P5、P10和P13酶带位置基本一样，但在Rf 2.7、Rf 3.3、 Rf 3.6这3条酶带上稍有不同；菌株P9和P11相对其他品种而言，酶带明显较少，其中，Rf 0.2是P11的特征酶带。
由图3可见，14个菌株在74%相似水平上可以分为五大类，第1类群为菌株P14、P2、P1、P6、P7、P8和P4，第2類群为菌株P11，第3类群为P13、P10、P5，第4类群为P12和P3，第5类群为P9，其中第1类群所占比例较大，占50%；菌株P14、P2、P1、P6、P7和P8的相似系数为1，结合拮抗反应，说明P14、P2、P1、P6、P7与P8极有可能为同一菌株。
3 结论
试验结果表明，杏鲍菇菌株P5的菌丝生长速度最快，与其他菌株菌丝的生长速度之间存在差异， 其次是杏鲍菇菌株P12、P9、P11， 生长相对最慢的是菌株P13和P4； 各菌株间产量有着明显的差别，其中，产量最高的菌株P14，其次为菌株P3、P12和P11，产量最低的是菌株P13，菌株P13、P1和P2菇型不整齐，出现畸形菇；从产量来看，菌株P3、P14、P12为优良菌株，可以推荐应用到桑枝栽培杏鲍菇生产中去。
拮抗试验是鉴定菌株间遗传差异的传统方法，菌丝之间的拮抗反应是菌株间不同遗传特性的重要表现，可表明不同菌株分属于不同亲和群。从测定结果看，14个杏鲍菇菌株生物学特性表现出一定差异，拮抗现象比较明显。同工酶酶谱可作为鉴定物种，研究分类、进化与变异的重要指标。试验结果表明，杏鲍菇菌株酯酶同工酶酶谱丰富、酶带活性强、带型各异，这说明编码同工酶的基因数量多，有极丰富的遗传多态性。
综合杏鲍菇菌株生物学特性、出菇试验、拮抗试验、同工酶试验结果发现，拮抗试验和同工酶试验结果基本吻合，14个杏鲍菇菌株大致可以分为五大类群。菌株的菌丝生长速度和产量没有表现出各类群特点，这是由于菌丝生长速度和产量易受环境条件和基因显隐性的影响。
参考文献：
[1]姚祥坦，张 敏，徐素琴. 不同桑枝屑配比培养料对杏鲍菇生长及产量影响[J]. 中国食用菌，2009，28（2）：65-66.
[2]黄志龙，肖淑霞，上官舟建. 杏鲍菇优良菌株筛选及配套标准化栽培技术[J]. 食用菌，2008，30（2）：25-27.
[3]黄晨阳，张金霞，陈 强，等. NY/T 1097—2006 食用菌菌种真实性鉴定酯酶同工酶电泳法[S]. 北京：中国标准出版社，2006.