【摘 要】
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为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0.经测序鉴定正确后,用
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为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0.经测序鉴定正确后,用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因与经同样双酶切处理的pET-32a(+)进行连接,构建重组质粒pET-EP0.将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDSPAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达情况及反应原性.结果表明,成功扩增得到EP0基因编码区序列,大小为1227 bp;重组表达质粒pET-EP0经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约为75 ku,主要以包涵体形式存在,且能与伪狂犬病毒阳性血清反应.
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