【摘 要】
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目的建立胰腺癌耐药细胞株，探寻新的胰腺癌细胞耐药基因并初步研究其作用机制。方法采用大剂量间歇诱导法建立对顺铂(CDDP)和吉西他滨(GEM)耐药的细胞株。采用细胞计数试剂盒8(CCK－8)法检测其半数致死量(IC50)、耐药指数(R)及交叉耐药情况，并观察其生长差异。应用流式细胞术检测耐药细胞的周期变化，Transwell迁移实验检测其迁移能力的改变，实时荧光定量聚合酶链反应(RT－qPCR)检测
【机 构】
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100021 国家癌症中心 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院 分子肿瘤学国家重点实验室,100021 国家癌症中心 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院 分子肿瘤学国家重点实验室,100021 国
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目的建立胰腺癌耐药细胞株，探寻新的胰腺癌细胞耐药基因并初步研究其作用机制。
方法采用大剂量间歇诱导法建立对顺铂(CDDP)和吉西他滨(GEM)耐药的细胞株。采用细胞计数试剂盒8(CCK－8)法检测其半数致死量(IC50)、耐药指数(R)及交叉耐药情况，并观察其生长差异。应用流式细胞术检测耐药细胞的周期变化，Transwell迁移实验检测其迁移能力的改变，实时荧光定量聚合酶链反应(RT－qPCR)检测细胞中多药耐药相关基因的变化。
结果成功获得对CDDP耐药的细胞株JF305/CDDP和对GEM耐药的细胞株PANC－1/GEM。JF305/CDDP和PANC－1/GEM细胞株的耐药指数分别为15.3和27.31，并存在交叉耐药。与亲代细胞相比，JF305/CDDP细胞的生长增殖速度减慢，第4天时吸光度(A)值分别为0.60±0.01和1.00±0.06(P＝0.002)；JF305/CDDP细胞的G1＋G2期细胞比例增加[(70±3)%和(55±3)%]，而S期细胞比例减少[(30±2)%和(45±2)%，P＝0.041]；JF305/CDDP细胞穿过Transwell小室的数量增加[(158±5)个/视野和(32±1)个/视野，P<0.001]；JF305/CDDP细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)和同源(异型)框基因2(MSX2)的表达量增加到(5.10±0.63)倍、(7.20±0.84)倍和(6.95±0.77倍)。在JF305细胞中，敲降MSX2则MRP2表达降低(0.69±0.17)；在PANC－1细胞中，过表达MSX2则MRP2表达升高(2.1±0.31)。
结论成功建立了2株稳定的耐药胰腺癌细胞株JF305/CDDP和PANC－1/GEM。发现了新的耐药相关基因MSX2，MSX2可能通过上调MRP2的表达促进胰腺癌细胞耐药。
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