人CD40L胞外区和人CTLA4Ig双基因共表达腺病毒载体的克隆和鉴定

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目的 :构建人CD40 L胞外区和CTLA4Ig双基因共表达重组腺病毒载体并鉴定。方法 :RT -PCR扩增人CD40 L胞外区片段 ,与致瘤素信号肽连接后构建穿梭质粒 ,经酶切、插入、同源重组 ,获质粒pAdshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,经 2 93细胞包装 ,获共表达双基因的腺病毒pAdvshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,并行凝胶电泳、PCR、共聚焦显微镜检测。结果 :电泳、PCR扩增出了 6 0 0bp和 4 0 0bp的特异性片段、共聚焦显微镜观察到CD40 L绿色荧光和CTLA4Ig红色荧光的共表达。结论 :成功构建了人CD40 L胞外区和CTLA4Ig共表达双基因重组腺病毒载体。
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