【摘 要】
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目的 为研究新近发现的大肠埃希菌(E.coli)VI型分泌系统的组成和功能,制备与之相关的三种重要蛋白AaiC,CRP和OmpA的多克隆抗体,并对分泌蛋白AaiC进行检测.方法 采用PC R技术
【机 构】
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上海交通大学,上海交通大学2006级临床医学八年制
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目的 为研究新近发现的大肠埃希菌(E.coli)VI型分泌系统的组成和功能,制备与之相关的三种重要蛋白AaiC,CRP和OmpA的多克隆抗体,并对分泌蛋白AaiC进行检测.方法 采用PC R技术扩增出目的 基因,并将其连接到pET-226或pQE80原核表达载体中,酶切及测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白并纯化,使用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blotting检测抗体.应用AaiC抗体检测E.coli RS218菌株分泌蛋白.结果 重组质粒构建成功,并能够在E.coli中高效表达,免疫得到AaiC,CRP和OmpA高效价的特异性多克隆抗体.AaiC抗体检测证实RS218菌株能够分泌AaiC蛋白.结论 成功制备了E.coli三种重要蛋白AaiC,CRP和OmpA的特异性抗体,检测出RS218菌株分泌AaiC蛋白,为进一步研究E.coli VI型分泌系统的生物学功能以及E.coli的致病机制奠定了基础.
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