促凋亡分子Noxa介导依托泊苷引起的神经母细胞瘤细胞死亡的实验研究

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目的

研究化疗药物依托泊苷是否通过促凋亡分子Noxa引起儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞的死亡。

方法

培养人NB TB3和TB8细胞,分别给予不同浓度的依托泊苷(0,0.125,0.25,0.5,0.75,1.0 mg/L)处理,并利用CCK8检测细胞存活的变化情况;收集处理不同时间的TB3和TB8细胞,提取RNA及蛋白,定量PCR方法检测Noxa的mRNA水平表达,Western Blot方法检测Noxa的蛋白水平表达,然后利用Noxa的siRNA转染细胞,观察依托泊苷对细胞存活率的影响情况。

结果

经过浓度分别为0.125 mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L、0.75 mg/L、1.0 mg/L的依托泊苷处理后,TB3细胞存活率分别为(73.13±8.45)%、(56.18±10.50)%、(33.90±4.17)%、(26.76±6.67)%、(13.49±0.58)%,差异有显著统计学意义(P均<0.01);TB8细胞存活率分别为(71.06±6.96)%、(37.45±0.68)%、(25.53±3.70)%、(20.28±2.75)%、(10.09±2.52)%,差异有显著统计学意义(P均<0.01)。依托泊苷处理的TB3和TB8细胞Noxa mRNA和蛋白质表达量明显升高,并且表达趋势有时间依赖性;Noxa的siRNA转染细胞后,能够降低Noxa在TB3和TB8细胞中的表达。依托泊苷浓度为0.5mg/L时,转染对照siRNA、Noxa siRNA1、Noxa siRNA2的TB3细胞存活率分别为(45.12±13.58)%、(72.70±21.34)%、(52.08±20.36)% ;TB8细胞存活率分别为(35.52±0.38)%、(63.94±0.10)%、(50.27±1.62)%,差异有显著统计学意义(P均<0.01)。依托泊苷浓度为1.0 mg/L时,转染对照siRNA、Noxa siRNA1、Noxa siRNA2的TB3细胞存活率分别为(13.26±1.84)%、(51.08±2.41)%、(42.80±1.42)%,差异有统计学意义(P均<0.05),TB8细胞存活率分别为(22.22±3.39)%、(58.00±11.37)%、(40.55±6.94)%,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论

Noxa介导化疗药物依托泊苷能引起NB TB3和TB8细胞死亡。

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