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目的
构建CCDC67基因慢病毒表达载体，为后续转染目的细胞奠定基础，并实现在细胞中高效、稳定表达。
方法从含有CCDC67基因的cDNA文库中，利用PCR方法钓取CCDC67基因编码区片段。将目的基因与酶切载体pGV-208进行定向连接，其产物转化细菌感受态细胞。对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定，再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析，对比正确的克隆即为构建成功的目的质粒。将构建成功的目的质粒和两种辅助包装质粒共转染293T细胞，包装成慢病毒，在荧光显微镜下观察慢病毒转染293T细胞后荧光表达情况。采用Western blot检测CCDC67及绿色荧光蛋白融合蛋白表达情况。
结果PCR产物经电泳分析表明成功获取CCDC67基因cDNA克隆，测序结果显示慢病毒转染质粒连接构建正确。荧光表达检测显示293T细胞中产生慢病毒颗粒，Western blot显示CCDC67在细胞内稳定表达。
结论成功构建CCDC67基因慢病毒表达载体，为后续转染目的细胞后从分子水平探讨CCDC67基因功能奠定了实验基础。