【摘 要】
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从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高。本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3
【机 构】
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中国药科大学,南京军区南京总医院药理科
【基金项目】
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本文系国家自然科学基金项目(Nos.81673390,81603219)、江苏省重点研发计划(社会发展)项目(No.BE2016745)、江苏省基础研究计划(自然科学基金)项目(No.BK20151445)和药物质量与安全预警教育部重点实验室资助项目(No.DQCP2017MS01)和江苏省青蓝工程资助
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从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高。本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3基因甲基化检测方法,以ACTB基因作为参比基因,通过优化反应体系中探针浓度、Flap核酸内切酶与Taq酶用量,提高BMP3目标基因与ACTB参比基因的扩增效率至接近100%,实现了利用ΔCT法进行BMP3基因甲基化水平的相对定量,可对低至10 copies的甲基化BMP3基因进行检测,并可从非甲基化模板中准确定量0.01%的甲基化模板
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