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目的
探讨双氢青蒿素(DA)对核因子κB受体激动剂配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞的影响。
方法通过细胞计数试剂盒(CCK-8)确定不同浓度(1、5、10、50、100、200 μmol/L)DA对RAW264.7细胞的生存影响。分别用50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL＋5、10、50、100 μmol/L DA诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞，共3 d。对形成的破骨细胞用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数，TRAP染色阳性且细胞核数目>3个认为是成熟的破骨细胞。50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL＋10、100 μmol/L DA培养RAW264.7细胞24 h，用Trizol试剂提取总RNA，并使用荧光实时定量PCR检测破骨细胞分化相关基因NFATc1、c-fos及Cathepsin K的表达。
结果1、5、10、50、100 μmol/L DA对RAW264.7细胞毒性较小，细胞存活率均>90%。TRAP染色显示，5、10、50、100 μmol/L DA可以减少RANKL诱导成熟破骨细胞的数目，并呈剂量依赖关系(F＝139.156, P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示，10、100 μmol/L DA具有下调破骨细胞分化关键基因NFATc1和c-fos表达的作用，且100 μmol/L抑制作用比10 μmol/L明显，但两种浓度DA对Cathepsin K的表达无明显影响。
结论DA对RAW 264.7细胞毒性较低，通过下调RAW 264.7细胞NFATc1和c-fos基因表达抑制RANKL诱导破骨细胞形成。DA可以作为治疗骨质破坏性疾病的潜在药物。