【摘 要】
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目的探讨帕金森氏病相关蛋白Pink1在自噬过程的作用。方法采用RT-PCR扩增基因片段,构建Pink1﹑自噬抑制蛋白Bcl-XL和自噬激活因子Beclin1等重组质粒,并通过慢病毒系统建立稳定
【机 构】
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四川大学华西第二医院发育干细胞研究所; 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室;
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目的探讨帕金森氏病相关蛋白Pink1在自噬过程的作用。方法采用RT-PCR扩增基因片段,构建Pink1﹑自噬抑制蛋白Bcl-XL和自噬激活因子Beclin1等重组质粒,并通过慢病毒系统建立稳定表达Pink1-Flag的HEK293细胞株,通过重组质粒转染细胞,过表达相关蛋白,用免疫共沉淀和Western blot检测Pink1和Bcl-XL的相互作用,Pink1对Bcl-XL和Beclin1相互作用的影响,以及Pink1对自噬的影响。结果自噬抑制蛋白Bcl-XL与Pink1有相互作用,过量表达Pink1可以抑制Bcl-XL与自噬激活因子Beclin1的相互作用。过量表达Pink1提高自噬下游蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ。结论帕金森氏病相关蛋白Pink1通过与自噬抑制蛋白Bcl-XL相互作用释放自噬促进因子Beclin1来激活自噬。
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