论文部分内容阅读
目的:探讨制备人间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)来源的细胞外微囊(extracellular microvesicle,MV)的适宜条件.方法:无血清条件下培养人脐带来源MSC,细胞融合达80％时,用基础培养液培养72 h后,收集培养细胞的上清,使用浓缩试剂浓缩细胞外微囊,经流式细胞术及电子显微镜鉴定,以蛋白总量为微囊含量指标.调整上清不同pH值,探测MV收获量.去营养后,收集不同培养时间的培养上清,富集微囊并测定蛋白含量,确定不同培养时间微囊产量.结果:富集的细胞外微囊表达CD9、CD63和CD81,电子显微镜下微囊呈圆形,直径在100 nm左右.使用微囊富集试剂盒收集、培养上清pH值分别为3,7和9时,每10 7个MSC收获的蛋白量分别为416.8±128.1、255.4±77.9和142.8±46.4μg,3组比较有明显差异(P＜0.05).饥饿培养48、72和96 h,每l07个MSC收获的蛋白量分别为173.6±44.5、262.4±49.6和364.2±37.8μg,3组存在显著差异(P＜0.05).结论:去营养培养96 h后收集MSC培养上清,调整pH值至3.0,可获得较多的细胞微囊.