论文部分内容阅读
目的观察新型重组人血管内皮抑素(Endostar,恩度)联合放疗在不同时间、恩度给药剂量、放疗剂量条件下对小鼠肝癌移植瘤的抑瘤效果。方法建立小鼠肝癌移植瘤模型。根据不同给药时间,分别将60只荷瘤小鼠按照给药剂量、是否联合放疗进行分组,每组10只;隔日测量肿瘤长径与短径;对比不同给药时间各分组的抑瘤效果。将小鼠随机分为6组,每组30只,处理方法同早给药方式分组,分析荷瘤小鼠的生存期。采用MTT法观察恩度浓度、射线剂量对协同作用的影响。采用Western blotting法检测不同给药方式各组中EGF、Flt-1蛋白的表达。采用免疫组化法检测荷瘤小鼠肿瘤微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)、KDR的表达。采用电子显微镜观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。结果与对照组比较,单独应用恩度能够抑制小鼠移植瘤生长(P<0.05),恩度早给药方式优于晚给药方式(P<0.05)。8mg/kg恩度+RT组出现协同作用,其抑瘤率为58.0%,优于其他各组(P<0.05)。8 mg/kg恩度+RT组小鼠的中位总生存期为55.6天,小鼠存活延长率为29.3%,优于其他各组(P<0.05)。5μg/ml恩度与4 Gy射线联合作用于HUVECs,具有协同作用,增殖抑制率为59.20%,优于其他恩度剂量组(P<0.05)。200μg/ml恩度与4 Gy射线联合作用于Hep G2细胞,具有协同作用,增殖抑制率为43.45%,优于其他恩度剂量组(P<0.05)。5μg/ml恩度与不同剂量射线作用于HUVECs以及200μg/ml恩度联合不同剂量射线作用于Hep G2细胞,其增殖抑制率均优于相应的单用恩度或放疗(P<0.05)。Western blotting检测显示,早给药方式中8 mg/kg恩度组和8 mg/kg恩度+RT组的EGF表达量均低于晚给药方式(P<0.05),而两种给药方式之间Flt-1蛋白表达的差异均无统计学意义(P>0.05)。恩度联合放疗能够有效减少荷瘤小鼠MVD,8 mg/kg恩度+RT组的MVD为8.6±1.3,显著低于其他各组(P<0.05);8 mg/kg恩度+RT组的VEGF和KDR表达水平均显著低于其他各组(P<0.05)。电子显微镜显示,恩度联合放疗组的细胞呈现明显的凋亡改变。流式细胞术检测显示,8 mg/kg恩度+RT组的肿瘤细胞生长分裂受阻于S期,细胞凋亡率显著高于其他各组(P<0.05)。结论恩度联合放疗的协同作用与给药时间、给药剂量、放疗剂量有关,恩度早给药方式的抑瘤效果优于晚给药。