【摘 要】
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目的基于ITS序列上变异位点设计特异性引物对霍山石斛及其常见混伪品(铁皮石斛和河南石斛)进行有效鉴别。方法利用最大简约法(MP)和贝叶斯法(BI)构建霍山石斛及常见混伪品的
【机 构】
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皖西学院; 安徽省石斛产业化开发协同创新中心; 安徽中医药大学;
【基金项目】
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安徽高校自然科学研究项目资助(KJ2016SD61);中央财政林业科技推广示范资金项目资助(2016TG05);国家林业行业标准制修订项目资助(2015-LY-152);现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-21);安徽高校省级自然科学研究项目资助(KJ2014A279)
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目的基于ITS序列上变异位点设计特异性引物对霍山石斛及其常见混伪品(铁皮石斛和河南石斛)进行有效鉴别。方法利用最大简约法(MP)和贝叶斯法(BI)构建霍山石斛及常见混伪品的系统发育树,并基于ITS序列上变异位点以霍山石斛为正品设计特异性PCR引物SH-CP9s/SH-CP9a、SH-CP25s/SH-CP25a、SH-CP29s/SH-CP29a,优选扩增条件,用于霍山石斛及其混伪品鉴别。结果在系统发育树中霍山石斛聚类为一个单系。通过对PCR反应的退火温度、DNA模板用量进行优化,并对不同型号的PCR仪和Taq酶进行考察,分别获得霍山石斛的特异性PCR反应程序。在PCR产物中,正品出现目的条带,而混淆品不出现条带。结论 ITS序列能够作为霍山石斛的DNA鉴别条形码,且设计的特异性引物能够有效地区别霍山石斛与其混伪品。
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