目的　了解北京一家三级医院临床分离无乳链球菌的血清型、耐药性、毒力基因的特征及多位点序列分型（MLST）特征。方法　收集2018年一家医院住院患者分离到的无乳链球菌，通过聚合酶链式反应方法进行分子血清型分型和毒力基因检测，用MLST方法进行分子分型，通过VITEK 2药敏分析仪对菌株耐药性进行分析。结果　该院2018年分离到31株无乳链球菌，MLST分型以序列分型（ST）10为主，占29.03%，其次为ST17、ST19、ST1、ST12、ST24和ST485，另有2株菌为新的ST型；血清型分型以Ib 为主，占45.16%，其次为Ⅲ、Ⅴ及Ia型。31株无乳链球菌中对氨苄西林、奎奴普汀、利奈唑胺和万古霉素全敏感，对四环素耐药率最高（64.52%），其次为左氧氟沙星（58.06%）和克林霉素（38.71%）。克林霉素耐药仅发现于Ib 和Ⅴ型。本研究的31株无乳链球菌，hylB、cylE、cfb和lmb毒力基因检测均为阳性；毒力基因bac和fbsA在不同分型中携带率有差异，其中bac及fbsA在Ib型中携带率较高。结论　本研究基于MLST分型和血清分型，表明不同型别间耐药性和毒力基因的差异，提示Ib和Ⅴ型的耐药性及Ib型的毒力需要引起关注。