【摘 要】
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目的 研究桃叶珊瑚苷调控miR-217/DNA甲基转移酶1(DNA methyl-transferase 1,DNMT1)分子轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为的影响.方法 瘢痕疙瘩成纤维细胞分成anti-miR-NC组(转染inhibitor control)、anti-miR-217组(转染miR-217 inhibitor)、miR-NC组(转染mimics control)、miR-217组(转染miR-217 mimics)、si-NC组(转染siRNA control)、si-DNMT1组(转染
【机 构】
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长江大学 第二临床医学院 皮肤病与性病学,湖北 荆州430200;荆州市中心医院 皮肤科,湖北 荆州434031
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目的 研究桃叶珊瑚苷调控miR-217/DNA甲基转移酶1(DNA methyl-transferase 1,DNMT1)分子轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为的影响.方法 瘢痕疙瘩成纤维细胞分成anti-miR-NC组(转染inhibitor control)、anti-miR-217组(转染miR-217 inhibitor)、miR-NC组(转染mimics control)、miR-217组(转染miR-217 mimics)、si-NC组(转染siRNA control)、si-DNMT1组(转染DNMT1 siRNA)、对照组(常规培养)、低剂量实验组(15μmol·L-1桃叶珊瑚苷处理)、中剂量实验组(30μmol·L-1桃叶珊瑚苷处理)、高剂量实验组(60μmol·L-1桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-NC+高剂量实验组(转染inhibi-tor control,60μmol·L-1桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-217+高剂量实验组(转染miR-217 inhibitor,60μmol·L-1桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-217+si-NC+高剂量实验组(共转染miR-217 inhibitor、siRNA control,60μmol·L-1桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-217+si-DNMT1+高剂量实验组(共转染miR-217 in-hibitor、DNMT1 siRNA,60μmol·L-1桃叶珊瑚苷处理).以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹(Western blot)法检测DNMT1、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-217表达.以荧光素酶报告系统鉴定miR-217和DNMT1的靶向关系.结果 对照组、高剂量实验组、anti-miR-NC+高剂量实验组、anti-miR-217+高剂量实验组、anti-miR-217+si-NC+高剂量实验组、anti-miR-217+si-DNMT1+高剂量实验组瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性(OD值)分别为0.75±0.07,0.32±0.06,0.33±0.04,0.48±0.05,0.47±0.06,0.40±0.03,细胞凋亡率分别为(7.05±0.98)％,(18.92±1.20)％,(17.86±1.85)％,(12.56±1.32)％,(12.09±1.47)％,(16.28±1.58)％,PCNA蛋白表达量分别为0.89±0.09,0.27±0.03,0.28±0.05,0.44±0.06,0.45±0.05,0.30±0.04,Bax蛋白表达量分别为0.29±0.04,0.92±0.09,0.87±0.10,0.69±0.07,0.65±0.08,0.78±0.07,Bcl-2蛋白表达量分别为0.55±0.06,0.29±0.02,0.30±0.03,0.42±0.05,0.41±0.04,0.35±0.05,上述指标,高剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);anti-miR-217+高剂量实验组与anti-miR-NC+高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);anti-miR-217+si-DNMT1+高剂量实验组与anti-miR-217+si-NC+高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 桃叶珊瑚苷调控miR-217/DNMT1分子轴抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖并促进细胞凋亡.
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