【摘 要】
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目的 建立检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型和亚型特异性巢式聚合酶链反应(nPCR)分型法.方法 用DNAStar软件比较分析GenBank中登录的A～H 8种基因型HBV全基因组序列,用Primer Premi
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目的 建立检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型和亚型特异性巢式聚合酶链反应(nPCR)分型法.方法 用DNAStar软件比较分析GenBank中登录的A～H 8种基因型HBV全基因组序列,用Primer Premier 5.0软件进行引物设计,建立nPCR分型法.该法在第一轮扩增基础上,第二轮分为3步扩增:第一步用Mix A扩增,检测B、D基因型和C1、C2亚型;第二步用Mix B扩增,检测A基因型;第三步用Mix C扩增,检测B1和B2亚型.应用该法检测68份慢性HBV感染者的血清样本,并从中随机选取15份样本的PCR产物直接测序,以验证该法的准确性.结果 该法检测68份慢性HBV感染者血清样本中,23.53%(16/68)为B2亚型,11.76%(8/68)为C1亚型,48.53%(33/68)为C2亚型,1.47%(1/68)为D型,11.76%(8/68)为B2C2混合型,1.47%(1/68)为C2D混合型,1.47%(1/68)为B2C1D混合型.随机选取15份样本测序分型,结果 与PCR法一致.结论 nPCR分型法简单快速,具有较高的灵敏度和特异度,可检测A～D基因型和B1、B2、C1、C2亚型.
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