目的建立一种高效液相色谱法测定乳品中那他霉素残留的分析方法。方法样品经提取、超声和离心分离后,采用C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）进行分离,高效液相色谱法测定。检测波长为302 nm,流速为1.0 m L/min,进样体积为10μL,柱温为30℃。对样品的提取溶剂和色谱流动相进行了优化,并于国标测定方法的结果进行了比较。结果选择10%的冰乙酸水溶液和0.1%的BHT-甲醇溶液作为样品提取溶剂,甲醇-水-冰乙酸（60:40:6,V:V:V）作为流动相。本方法可以在7 min内完成对目标物的分离,纳他霉素的标准曲线方程为Y=1.0058X+0.0715,相关系数r=0.9995,方法检出限为0.1 mg/kg。纳他霉素在3个添加水平下的回收率在96.8%¹00%之间,测定的相对标准偏差均小于1.18%。本方法与国标方法相比,缩短了前处理时间,提高了方法的回收率。结论该方法快速、准确、精密度好,适用于检测批量乳品中纳他霉素的残留量。