【摘 要】
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目的建立快速准确的高效毛细管电泳（HPCE）定量基因组DNA甲基化的方法。方法以含有十二烷基磺酸钠（SDS）的碳酸氢钠溶液作为背景电解质溶液,优化运行电压、柱温,对DNA组成单元脱氧
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金(NSFC20905051);北京市科技新星计划B类(2009B36)
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目的建立快速准确的高效毛细管电泳（HPCE）定量基因组DNA甲基化的方法。方法以含有十二烷基磺酸钠（SDS）的碳酸氢钠溶液作为背景电解质溶液,优化运行电压、柱温,对DNA组成单元脱氧核苷酸进行分离定量。结果 5种脱氧核糖核苷和5种核糖核苷在10 min内实现基线分离。脱氧胞苷（dC）的标准曲线为Y=172540.15X-6.19,相关系数（R）为0.999,线性范围从2×10-3mol/L到2×10-1mol/L。5-甲基脱氧胞苷（5 mdC）的标准曲线为Y=170271.74X-46.19,相关系数（R）为0.995,线性范围从1×10-4mol/L到2×10-2mol/L。日内相对标准偏差（RSD%）<5%,日间相对标准偏差（RSD%）<9%。5 mdC和dC的检测限均为1×10-5mol/L。样品的甲基化程度以（5 mdC）含量占总脱氧胞苷（5 mdC+dC）的比率表示。应用本方法分析小牛胸腺DNA的甲基化水平,结果为6.18%,与本研究组所得液质联用（LC-MS/MS）的定量结果 （6.77%）和文献报导中应用液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）的检测结果 （6.26%）对比,一致性好。结论本研究建立的方法分析速度快,准确性高,稳定性好,灵敏度满足微量样本的检测需求,可以用于临床甲基化诊断。
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