【摘 要】
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目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默zeste基因增强子同源物2(EZH2)对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响.方法 体外化学合成EZH2基因特异性小干扰RNA,脂质体Lipofectamine2000介导转染人胃癌细胞MKN28；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测特异性siRNA对EZH2基因mRNA水平的沉默效果；采用阿霉素诱导细胞衰老,衰老相关-β-半乳糖苷酶(
【机 构】
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430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科Ⅱ,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科Ⅱ,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科Ⅱ,4300
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目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默zeste基因增强子同源物2(EZH2)对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响.方法 体外化学合成EZH2基因特异性小干扰RNA,脂质体Lipofectamine2000介导转染人胃癌细胞MKN28；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测特异性siRNA对EZH2基因mRNA水平的沉默效果；采用阿霉素诱导细胞衰老,衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测各组细胞衰老情况,激光共聚焦显微镜检测各组细胞胞核中衰老相关异染色质灶(SAHF)的形成.流式细胞仪和噻唑蓝实验(MTT)检测siRNA对细胞周期和生长的影响,并比较在阿霉素诱导下各组细胞的相应变化.结果 EZH2 siRNA能有效抑制MKN28细胞中EZH2 mRNA表达,促进阿霉素诱导的MKN28细胞衰老和SAHF形成,EZH2 siRNA+阿霉素组细胞SA-β-gal染色阳性率和SAHF形成比例明显高于对照组,分别为(87.88±2.66)％、(96.27±1.71)％和(42.01±7.50)％、(51.72±2.97)％,且EZH2 siRNA能阻滞MKN28细胞周期于G0/G1期,比例为(47.41±10.68)％,抑制细胞增殖,并促进阿霉素的阻滞细胞周期和抗增殖效应.结论 EZH2 siRNA可有效抑制胃癌细胞MKN28中EZH2表达,促进阿霉素诱导的胃癌MKN28细胞衰老,抑制细胞增殖。
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