为解决畜禽养殖污染问题及开发蛋白质饲料资源提供理论依据,以Alcalase碱性蛋白酶为工具,采用单因素(温度、酶解时间、pH值、酶用量及底物浓度比)试验考察了蚯蚓蛋白酶的酶解效果,再通过正交试验优化酶解参数。结果表明:1)单因素试验:蚯蚓蛋白水解度随酶解时间的延长而呈上升趋势,5h后上升趋于平缓;随着温度的升高和pH值的增大均呈先上升后下降的趋势,60℃和pH值达8.0时达最大值;随酶用量的增加和底物浓度的增大均呈先上升后下降的趋势,酶用量超过4%和底物浓度达6%后开始下降。正交试验:酶解温度、时间、pH和加酶量对蚯蚓蛋白的酶解度有显著或极显著的影响,4个因素作用的主次顺序为:酶用量>温度>pH>时间;最优组合为温度65℃、时间4h、pH值8.0、加酶量5%。Alca-lase碱性蛋白酶制备蚯蚓小肽的最佳工艺参数为底物浓度6%、温度65℃、时间4h、pH值8.0、加酶量5%。