液相色谱分析卡那霉素与庆大霉素C组分

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  卡那霉素分析
  氨基糖苷类抗生素(Aminoglycosides)是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素,它是抗生素中很重要的一类。研究表明:此类药物可影响细菌蛋白质合成的全过程,妨碍初始复合物的合成,诱导细菌合成错误蛋白以及阻抑已合成蛋白的释放,从而导致细菌死亡。由于氨基糖苷类抗生素无紫外吸收,在普通C18色谱柱上保留较弱,所以对于此类抗生素的分析一直是个难点,本文使用UPLC结合CAD检测器分析卡那霉素,方法灵敏度和准确性高,稳定性好。
  色谱柱:Waters BEH C18,1.7μm,2.1×100 mm,P/N:186002352;
  流动相:100 mM TFA/H2O-MeOH(97:3);
  检测方式:Corona Ultra电雾式检测器,雾化器温度:25℃;气体(N2)压力:35.0 psi;数据采集频率:10Hz;
  流速:0.2 mL/min;
  柱温:30℃;
  进样量:3μL。
  按照供试品溶液制备项下制得以下3种卡那霉素注射液供试品溶液,注入液相色谱仪进行测定,计算含量结果见表1,测定图谱见图1、图2.
  本实验采用UPLC-CAD对卡那霉素含量进行测定,实验精密度、重复性、稳定性都较好,方法准确度良好,灵敏度高。供试品溶液中卡那霉素与卡那霉素B分离度大于2.0,该方法完全可以用于其有关物质卡那霉素B的测定。CAD动态范围较宽,本方法不进行对数转换直接计算标准曲线方程y=52782x+19538,R值0.998(0.3μg~3μg)。电雾式检测器设置参数少,稳定性较好,受环境影响小。该检测器在测定氨基糖苷类物质上具有较高推广应用的价值。
  庆大霉素C组分分析
  庆大霉素是为数不多的热稳定性的抗生素,在人用药和兽药领域均大范围应用。这是一种常见氨基糖苷类抗生素,主要用于治疗细菌感染,尤其是革兰氏阴性菌引起的感染。庆大霉素能与细菌核糖体30s亚基结合,阻断细菌蛋白质合成。庆大霉素的主要成分包括四个组分,统称庆大霉素C组分,2010版中国药典使用ELSD测定,本文使用CAD检测器分析庆大霉素C组分,分离度较高,稳定性和重现性较ELSD有较大提高。图3、图4为测定谱图。表2、表3为分析结果。
  色谱柱:Acclaim 120 C18,5μm,4.6×150mm,P/N:059149;
  流动相:100mmol/L TFA/H2OMeOH(92:8);
  检测方式:Corona Ultra电雾式检测器,雾化器温度:25℃;气体(N2)压力:35.0 psi;数据采集频率:5 Hz;
  流速:0.6 mL/min;
  柱温:30℃;
  进样量:10μL。
  该样品C组分合格,符合C 1 25%~50%,C1a 15%~40%,(c2+c2a)% 20%~50%药典规定。
  本实验采用HPLC-CAD检测器对庆大霉素C组分进行测定,实验精密度、重复性、线性都较好。与蒸发光散射测定方法比较,不取对数线性相关系数就可以达0.999,从而计算结果不用进行对数转换,较ELSD检测大大简化了含量计算过程。对照品和供试品溶液色谱图中C2和C2a之间的峰为小诺霉素峰,它们三个之间的分离度大于2.0,由于该化合物为庆大霉素C组分中的次要成分,所以未对其进行分析。CAD检测器操作简单,设置参数少,稳定性较好,受环境影响因素少。该检测器在测定氨基糖苷类物质上具有较高推广应用的价值。
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