山葵的离体快速繁殖

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1 植物名称 山葵(Eutrema wasabi)日本品种岛根3号。2 材料类别 无菌萌发的种子苗。3 培养条件 基本培养基为自行设计的“贵山”(代号GS)配方[其大量元素组分为:每L含(NH4)2SO4 0.321 g、KNO3 1.281 g、KH2PO40.200 g、CaCl2·2H2O 0.887 g和MgSO4·7H2O0.746 g,铁盐、微量元素和维生素组分均与MS配方相同]。种子萌发培养基为:(1)GS+6-BA 0.2mg·L-1(单位下同);芽增殖培养基为:(2)GS+6-BA 0.4;生根培养基为:(3)GS+IBA 0.4。蔗糖在培养基(1)、(2)和(3)中的浓度分别为2%、3.5%和3%。各培养基的琼脂含量均为0.8%,pH 5.8。培养在光照培养箱中进行,温度为16℃,每天照光13 h,光照度为1 000~2 000 lx。4 生长与分化情况4.1 无菌种子苗的培育 种子先用70%乙醇浸渍20 s,以无菌水冲洗干净,再用0.1%升汞水浸泡10 min,无菌水冲洗6遍后,播种于培养基(1)上。培养20 d后种子开始发芽,再过28 d萌发成长为上端具有3个左右的芽,下端已生根的多芽苗。4.2 芽的增殖 从种子苗顶端切割出的单芽接种在培养基(2)上,培养30~35 d后即形成带有4个芽的芽丛。若每35 d继代增殖1次,每次的芽增殖率均保持在4倍左右。由1个单芽开始扩繁,每35d继代1次,1年内可继代10次,从理论上计算可以获得1 048 576个芽。4.3 根的诱导和植株再生 将增殖形成的芽丛分割成单芽,接种于培养基(3)上,培养35 d后的生根率达100%,且形成株高约6 cm的再生小植株。4.4 移栽 将生根培养瓶的封口膜揭开,再生小植株锻炼2 d后,小心取出,洗净根部附着的琼脂,移栽到盛有腐叶土和珍珠岩(3:1)的塑料营养杯中,置于家庭居室的北向阳台上培养,第1个星期在营养杯上方罩塑料薄膜保湿。在贵阳地区气候条件下,除7、8、1、2月份外,其它月份移栽25 d后的成活率均达90%以上。5 意义与进展 山葵又名山萮菜,是十字花科山萮菜属辛香料蔬菜和药用植物。其根状茎富含由芥子油和糖类结合成的配糖体、酶和维生素,研磨后产生特殊的辛辣味,有促进食欲、防腐抗菌及多种其它药用功能,是日本式饮食的重要佐料。此种植物的栽培对生态环境要求苛刻,故种植面积有限,市场供不应求。山葵传统上靠根状茎长出的侧芽分株繁殖,不仅繁殖系数低,而且极易导致黑心病传播。若进行种子繁殖,则存在种子活力不易长期保持,休眠和萌发过程均难以人工控制,以及易受十字花科其它植物串粉杂交等问题的困扰。以组织培养方法繁殖,可在短期内提供大量健壮且不带病的种苗。以无菌苗顶端作为起始外植体进行山葵离体快速繁殖,目前国内外尚未见报道。
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