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目的
构建E3区缺失的7型腺病毒疫苗株(Ad7v)载体并表达β-半乳糖苷酶基因。
方法从人二倍体细胞W138培养的Ad7v中分离病毒DNA,利用Ad7vDNA天然的酶切位点,经过多步亚克隆,克隆的同时将E3区78.8-87mu片段缺失,并将多克隆酶切位点带入Ad7v载体。为了验证载体的功能,将带有巨细胞病毒(CMV)早期启动子β-半乳糖苷酶基因插入缺失的E3区。将这一重组质粒和Eco R I酶切Ad7v DNA共转染293细胞,获得表达β-半乳糖苷酶重组病毒。
结果构建了缺失部分E3区Ad7v载体,在CMV启动子的作用下该载体能有效地表达外源基因。
结论Ad7v载体的构建并成功表达外源基因为开发和应用这一载体打下了重要的基础。