【摘 要】
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目的 探讨高表达的微小RNA-130b-3p(MiR-130b-3p)参与肾脏损害的可能机制.方法 肾小管上皮细胞(HK-2)分别转染MiR-130b-3p模拟物(mimic)、对照mimic (NC mimic),并给予10 μg
【机 构】
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200127,上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科;
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目的 探讨高表达的微小RNA-130b-3p(MiR-130b-3p)参与肾脏损害的可能机制.方法 肾小管上皮细胞(HK-2)分别转染MiR-130b-3p模拟物(mimic)、对照mimic (NC mimic),并给予10 μg/L TGF-β1刺激.实时定量PCR和West印迹分别检测转染72 h后细胞Ⅳ型胶原蛋白(CollegenⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollegenⅠ)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测MiR-130b-3p潜在靶基因,West印迹检测潜在靶基因ERBB2IP和PPARγ蛋白表达水平;分别构建含ERBB2IP 3端非编码区(3-UTR)和PPARγ 3-UTR的双荧光素酶报告基因载体,采用双荧光素酶报告基因方法检测靶基因荧光活性.结果 无刺激转染HK-2细胞后MiR-130b-3p mimic组与NC mimic组比较CollegenⅣ、α-SMA、Collegen Ⅰ、E-cadherin mRNA和蛋白表达差异均没有统计学意义(均P＞0.05).但在TGF-β1刺激后,与NC mimic组比较,MiR-130b-3p mimic组CollegenⅣ、α-SMA、Collegen Ⅰ mRNA和蛋白表达水平均显著上调,E-cadherin的表达降低(均P＜0.05).与NC mimic组比较,MiR-130b-3p mimic组潜在靶基因ERBB2IP和PPARγ mRNA和蛋白表达水平均下调(均P＜ 0.05);双荧光素酶报告基因结果显示,与NC mimic组比较,MiR-130b-3p mimic组ERBB2IP荧光素酶活性降低(P＜0.01),而突变(mut)-MiR-130b-3p mimic组无明显变化(P＞0.05);与NC mimic+mut-PPARγ-3UTR共转染组比较,MiR-130b-3p+mut-PPARγ-3UTR组PPARγ荧光素酶活性降低,而PPARγ-3UTR共转染MiR-130b-3p组PPARγ荧光素酶活性比mut-PPARγ-3UTR共转染MiR-130b-3p组进一步降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 MiR-130b-3p通过直接抑制ERBB2IP和PPARγ的表达而促进肾小管上皮细胞上皮细胞-间充质细胞转分化作用,从而参与狼疮肾炎早期肾脏损害.
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