脐带间充质干细胞外泌体提取方法的比较研究

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目的 比较脐带间充质干细胞来源外泌体的2种提取方法:超速离心及聚乙二醇沉淀法,测定不同方法提取的外泌体浓度并鉴定其形态及生物学功能,为外泌体的后续应用研究奠定基础.方法 采用超速离心法及聚乙二醇沉淀法提取脐带间充质干细胞外泌体,通过BCA法测定蛋白浓度,透射电镜、纳米颗粒示踪分析技术及Western blot等鉴定不同方法提取得到的外泌体.结果 超速离心法提取的外泌体在透射电镜下呈典型杯状结构,平均粒径大小为166.5 nm,Western blot检测结果显示其表达外泌体标志性蛋白CD 9、Flotillin 1,不表达细胞内质网标志性蛋白Calnexin,而聚乙二醇沉淀法提取的外泌体虽然蛋白浓度高,但杂质含量多,形态、粒径均不符合外泌体特征,不表达外泌体标志性蛋白.结论 与聚乙二醇沉淀法相比,超速离心法提取的外泌体纯度高,电镜下形态及粒径分布范围符合外泌体的生物学特性,更适合外泌体的功能研究.
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