【摘 要】
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目的评价甲醛及β-丙内酯对纯化柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CV-A16）灭活效果及免疫原性的影响。方法将制备的CV-A16-168病毒液经浓缩、纯化后,用不同浓度甲醛（1∶400、1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000）及β-丙内酯（1∶1 000、1∶2 000、1∶3 000、1∶4 000）灭活,CV-A16抗原ELISA检测试剂盒检测抗原含量,确定最
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室
【基金项目】
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云南省科技厅重点新产品研发计划（2015BC008）；
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目的评价甲醛及β-丙内酯对纯化柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CV-A16）灭活效果及免疫原性的影响。方法将制备的CV-A16-168病毒液经浓缩、纯化后,用不同浓度甲醛（1∶400、1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000）及β-丙内酯（1∶1 000、1∶2 000、1∶3 000、1∶4 000）灭活,CV-A16抗原ELISA检测试剂盒检测抗原含量,确定最适灭活浓度。用1∶4 000甲醛及1∶2 000β-丙内酯灭活CV-A16-168,按抗原含量分别制备为640和320 U/mL,加入Al（OH）3佐剂,制备灭活CV-A16-168实验疫苗,免疫BALB/c小鼠2次,间隔28 d,于首次免疫后28、35 d采血分离血清,采用体外微量中和试验检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞术检测血清细胞因子水平。将甲醛灭活和β-丙内酯灭活实验疫苗分别腹腔注射5只BALB/c雌鼠和雄鼠2次,间隔28 d,初免后7 d,雌雄小鼠合笼,怀孕后取出单独饲养,待乳鼠出生48 h内,分别用CV-A16-G10株（原型株,A基因型）、CV-A16-154株（B基因型）及CVA16-G20株（B基因型）进行1 000 LD50的病毒株颅内注射,观察21 d乳鼠的临床症状及生存情况。结果 1∶4 000甲醛37℃3 d及1∶2 000β-丙内酯4℃24 h均可完全灭活CV-A16-168。小鼠经灭活CV-A16-168实验疫苗免疫后,血清中和抗体阳转率均达到100%,甲醛灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶7 131.55和1∶5 042.77,平均增长42.2和45.3倍;β-丙内酯灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶10 085.54和1∶6 208.38,平均增长42.2和48.5倍;不同灭活剂处理的相同抗原含量间抗体GMT差异无统计学意义（P均＞0.05）,但组内二次免疫间的抗体GMT差异有统计学意义（P ＜0.001）;甲醛和β-丙内酯灭活实验疫苗免疫小鼠后均诱导产生IFNγ,抗原含量640与320 U/mL组比较,有显著升高（P ＜0.001）。乳鼠经CV-A16不同基因型毒株攻毒,观察21 d后,全部存活,母传抗体可对不同基因型毒株颅内注射攻毒的乳鼠产生100%的保护。结论 1∶4 000甲醛及1∶2 000β-丙内酯均可完全灭活CV-A16,灭活后的免疫原性无显著差异,为CV-A16灭活疫苗的开发及研究奠定了基础。
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