探讨大鼠颅脑液压冲击伤脑损伤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12蛋白及其mRNA的表达变化及其意义。
方法成年雄性SD大鼠48只应用Dixon法制作颅脑损伤模型,造模后6、12、24 h、3 d用免疫组织化学方法、蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分别测定Caspase-12蛋白及其mRNA的表达,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)测定神经细胞凋亡变化。应用SPSS 22.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较差异性分析采用Student’s t检验。
结果与假手术组(Sham组)比较,模型组(TBI组)自伤后6 h,损伤灶周脑组织Caspase-12蛋白开始增加[积分吸光度(IA) 0.165±0.021],24 h达高峰(0.489±0.034),3 d开始下降(0.258±0.027),差异有统计学意义(t=2.293、4.594、6.488、3.605,P<0.05)。Western blot进一步印证了Caspase-12蛋白变化趋势。Caspase-12 mRNA于伤后6h开始增加(0.626±0.054),12 h达高峰(0.867±0.048),持续至3 d后下降(0.764±0.077),差异有统计学意义(t=2.326、4.185、3.607、2.215,P<0.05);TUNEL发现神经细胞凋亡指数(AI)自6 h开始增高(22.372±3.304),24 h达到峰值(55.222±4.123),3 d时出现下降(28.226±3.273),差异有统计学意义(t=3.093、6.224、6.984、4.133,P<0.05)。
结论内质网应激的特异性关键蛋白Caspase-12表达上调在液压冲击脑损伤的神经细胞凋亡中起重要作用。