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目的
探讨软骨微粒复合Ⅱ型胶原蛋白/透明质酸/硫酸软骨素(COLⅡ/ HA/CS)仿生基质溶胶体外构建组织工程软骨可行性。
方法从5个月龄贵州小香猪关节获取软骨微粒,用不同孔径的微粒筛过滤后分别培养,在1、3、7 d观察软骨细胞脱落、增殖;将COLⅡ/HA/CS按质量比8.0∶1.5∶0.5配置成终质量浓度为10 g/L的仿生溶胶,观察成胶效果;选用增殖能力最强的软骨微粒,按5×107/L与溶胶混合,培养1周后进行大体、活细胞免疫荧光、组织学观察。
结果不同粒径软骨微粒均可见软骨细胞脱落及增殖,粒径小于120μm的软骨微粒中细胞增殖能力最强,差异有统计学意义(P<0.05);仿生基质溶胶低温条件中和后具有流动性,交联并升温至37℃、6 min后成胶性能良好;软骨微粒与仿生溶胶共培养1周后,外观呈透明软骨样,表面光滑并具有一定弹性;免疫荧光见软骨细胞活性良好;组织学观察见软骨细胞从软骨微粒中脱落、增殖,微粒基质与凝胶融合。
结论粒径小于120μm的微粒中软骨细胞脱落增殖能力最强;软骨微粒与COLⅡ/HA/ CS仿生基质凝胶生物相容性好,构建组织工程软骨具有可行性。