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在pH 1.2-1.6的Clark-Lubs缓冲介质中,二溴羧基偶氮胂与蛋白质形成结合物,该结合物的最大吸收波长为604 nm比试剂本身红移了70 nm,表观摩尔吸光系数为2.548×10^5L·mol·cm^-1,蛋白质质量浓度在10-140 mg/L服从比耳定律。本法灵敏度较高,选择性好,用于人血清中总蛋白的测定,结果与经典的考马斯亮蓝法一致。