慢性氟中毒大鼠脊髓神经细胞凋亡及脱氟后变化的研究

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目的

探讨慢性氟中毒大鼠脊髓神经细胞凋亡及p53变化,并观察短期脱氟(脱氟12 w)后对脊髓神经细胞凋亡及p53蛋白表达的影响。

方法

120只Wistar大鼠按体质量采用随机数字表法分为4组:高氟组,饮含氟离子为200 mg/L的蒸馏水12 w;高氟对照组,饮蒸馏水12 w;脱氟组,先饮含氟离子为200 mg/L的蒸馏水12 w,再改为饮用蒸馏水12 w;脱氟对照组,饮蒸馏水24 w,每组30只。分别于第4、8、12周后测定4组大鼠尿氟含量,于第16、20、24周后测定脱氟组和脱氟对照组尿氟含量。第12周后,将高氟组和高氟对照组大鼠处死,脱氟组改饮蒸馏水。第24周后将脱氟组及脱氟对照组大鼠处死,所有大鼠均取脊髓,流式细胞仪观察脊髓神经细胞凋亡情况;免疫组织化学染色观察p53的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测p53蛋白的含量。

结果

流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,高氟组[(3.36±0.71)%]大鼠脊髓神经细胞凋亡率与高氟对照组[(0.78 ± 0.65)%]比较明显增加(t= 14.680,P < 0.01);脱氟组[(3.47±0.56)%]大鼠脊髓细胞凋亡率明显高于脱氟对照组[(0.83 ± 0.64)%,t= 17.003,P < 0.01],但与高氟组比较差异无统计学意义(P > 0.05)。免疫组化结果及Western blot结果显示,高氟组大鼠脊髓组织中p53蛋白表达与高氟对照组比较表达明显增多,差异有统计学意义(422.69±12.35比177.82 ± 14.16; 253.37±10.42比87.14 ± 7.39,t= 77.212、72.988,P均< 0.01);脱氟组大鼠脊髓组织中p53蛋白表达与脱氟对照组比较表达明显增多(418.75±11.84比163.47±8.57;248.29±10.23比98.74±11.52,t= 95.663、53.167,P均< 0.01),而与高氟组比较差异无统计学意义(418.75±11.84比422.69±12.35;248.29±10.23比253.37±10.42,t= 1.261、1.906,P均> 0.05)。

结论

慢性氟中毒大鼠的脊髓神经细胞存在明显凋亡,p53表达增多可能是造成损害的原因之一,脱氟后短时间内脊髓神经细胞凋亡的数量未见减少,p53的持续高表达可能是脊髓神经细胞凋亡未见降低的原因之一。

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