【摘 要】
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目的:构建并表达噬菌体呈现的天然抗角蛋白单克隆抗体(mAb) 3B4的单链抗体(scFv), 并测定其活性.方法: 分别以pMD-18T-mAb 3B4 VH和pMD-18T-mAb 3B4 VL为模板进行PCR, 扩增mA
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目的:构建并表达噬菌体呈现的天然抗角蛋白单克隆抗体(mAb) 3B4的单链抗体(scFv), 并测定其活性.方法: 分别以pMD-18T-mAb 3B4 VH和pMD-18T-mAb 3B4 VL为模板进行PCR, 扩增mAb 3B4的VH和VL基因, 然后将其依次插入噬菌体表达载体pscMH中.经DNA序列测定正确后, 转化大肠杆菌, 用辅助噬菌体VCSM13超感染诱导表达scFv; 用ELISA检测其与亲本mAb 3B4的抗原结合活性的改变.结果: 对扩增的mAb 3B4的VH和VL基因进行测序, 结果表明VH基因与原序列完全一致, VL基因在骨架区FR1有1个碱基发生突变.用VCSM13超感染后能检测到scFv的表达, 其与亲本一样具有多反应性, 但抗原结合模式不完全相同.结论: 成功地构建并表达了天然抗角蛋白mAb3B4噬菌体呈现的单链抗体, 表达的scFv与mAb 3B4的抗原结合活性有一定的差异, 为探讨天然自身抗体的抗原结合模式奠定了基础.
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