猪瘟病毒重组酶聚合酶扩增检测方法的建立及应用

来源 :中国兽医科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abcz123789
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本研究基于猪瘟病毒(CSFV)5’UTR保守序列,设计特异性引物,建立了可快速检测CSFV的反转录重组酶聚合酶扩增检测方法(reverse-transcription recombinase polymerase amplification,RT-RPA)。该方法在40℃下恒温20min即可完成反应;且特异性强,与其他瘟病毒和猪的重要病原无任何交叉反应。以体外转录的CSFV RNA为模板,该方法的检出下限为10~2 copies。采用RT-RPA方法和实时荧光RT-PCR(real-time RT-PCR)方法同时对57份临床样品进行CSFV检测,结果,RT-RPA方法的阳性检出率为56.14%(32/57),略低于real-time RT-PCR方法的阳性检出率(64.19%,37/57)。以real-time RT-PCR作为参考方法,所建立的RT-RPA方法的诊断特异性为100%,诊断灵敏度为89.19%。上述结果表明,本研究建立的CSFV RT-RPA检测方法操作简单、反应快速,对没有装备荧光PCR仪地区的猪瘟诊断防控具有重要意义。
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