【摘 要】
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为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157:H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,漯河出入境检验检疫局
【基金项目】
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河南省重大公益科研项目;国家科技支撑计划;漯河市科技计划项目
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为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157:H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立针对rfbE fliC基因的单一PCR方法；通过优化扩增条件,进一步建立可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法,并进行特异性和灵敏性试验,同时还初步应用到临床样品的检测中.结果表明:所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fliC基因( 247 bp)的特异性片段,特异性结果显示其他非大肠杆菌O157:H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性；灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102cfu/mL.通过试验初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法,为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157:H7提供了一种简单、灵敏的试验方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157:H7的分子流行病学调查.
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