人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-Fu的建立及其耐药机制的初步探讨

来源 :南京医科大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:ynshisss
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目的:建立人胰腺癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株Patu8988/5-Fu,观察其生物学特性并初步探讨其耐药机制。方法:采用5-Fu体外低浓度梯度递增联合大剂量冲击诱导法诱导培养人胰腺癌细胞株Patu8988,10个月建立获得性Patu8988/5-Fu多药耐药细胞株,光镜观察形态学变化;MTT法分析Patu8988/5-Fu耐药谱;绘制细胞生长曲线,计算倍增时间;流式细胞术分析亲子代细胞的细胞周期分布;RT-PCR检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及多药耐药基因(MDR1)的表达情况;罗丹明外排实验检测Patu8988/5-Fu细胞膜上的P-糖蛋白(P-gp)泵功能;Annexin V-FITC染色流式细胞术分析两种细胞株在受到5-Fu作用后的凋亡情况。结果:成功建立了人胰腺癌Patu8988/5-Fu多药耐药细胞株模型。与亲本细胞株Patu8988相比,Patu8988/5-Fu在形态学上发生了一系列变化;其对5-Fu、阿霉素(ADM)和吉西他滨(GEM)的耐药指数分别达到36.98(P<0.01)、2.76(P<0.05)和2.42(P<0.01);与亲本细胞株相比生长速度变慢,倍增时间延长(P<0.01);G0/G1期细胞分布比率略增多,而S期比率显著减少(P<0.01),G2/M期比率明显增加(P<0.05)。HIF-1α(P<0.01)、MDR1 mRNA(P<0.05)的表达亦明显高于亲本细胞株Patu8988。罗丹明在耐药细胞株内的积聚量低于亲本细胞株(P<0.01);在不同浓度梯度的5-Fu作用下Patu8988/5-Fu的凋亡率都较亲本细胞低(P<0.01)。结论:利用体外浓度梯度倍增法建立了稳定传代的人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-Fu。HIF-1α介导的凋亡耐受和通过上调主要耐药基因MDR1的表达可能在不同程度上参与了Patu8988/5-Fu获得性耐药的产生。
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