【摘 要】
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以本实验室扩增的内蒙猪圆环4型病毒(PCV4)毒株的ORF2基因序列为参考,对其密码子进行优化并送往公司进行质粒合成,通过设计特异性引物,扩增出Cap蛋白基因.将目的基因克隆至pE
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉133000;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所,吉林长春130122;扬州大学动物医学学院,江苏扬州225000;吉林农业大学动物医学学院,吉林长春130122
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以本实验室扩增的内蒙猪圆环4型病毒(PCV4)毒株的ORF2基因序列为参考,对其密码子进行优化并送往公司进行质粒合成,通过设计特异性引物,扩增出Cap蛋白基因.将目的基因克隆至pET-28a载体,构建出pET28a-PCV4-Cap重组表达质粒.将重组质粒转化至表达宿主菌BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达,制备PCV4 Cap重组蛋白.优化表达条件和SDS-PAGE分析结果显示,Cap重组蛋白能够在沉淀中大量表达且在IPTG终浓度为0.2 mmol/L、37℃诱导6 h条件下表达量最高,其约为27 kDa.经Western blot验证,条带单一,与预期结果相同.本试验结果为了解PCV4 Cap蛋白及建立PCV4血清流行病学快速检测方法奠定了基础.
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