探讨基于数据非依赖性采集高分辨率色谱-质谱技术（data independent acquisition liquid chromatography-mass spectrometry, DIA LC-MS）对于脓毒症外周血差异蛋白研究的可行性。

采用前瞻性研究，纳入2016年4月至2016年7月复旦大学附属上海市第五人民医院重症监护室（ICU）收治的10例脓毒症以及10例同时期入住ICU年龄性别相仿的术后未并发脓毒症的患者（疾病对照组）。采用最新的数据非依赖性采集技术（data independent acquisition，DIA）联合skyline数据提取软件对10例脓毒症和10例对照组的外周血单个核细胞的蛋白进行研究分析，所得的数据分别采用主成分分析法（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘法-判别分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）和正交偏最小二乘法判别分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）进行模式识别分析，确定外周血单个核细胞的差异蛋白，进行通路分析以及GO分析。根据PLS-DA模型变量的重要性投影（variable importance in the projection, VIP值）初步筛选可能的蛋白标志物，并对贡献最大（VIP >1, P<0.05）的3个蛋白进行ELISA验证和ROC曲线的分析。

总共鉴定到了1 062个碎片离子加和得到119个差异蛋白，其中31个蛋白上调，88个蛋白下调。通过通路分析发现与碳代谢，血小板激活，细菌侵袭上皮，补体凝血瀑布激活有关。其中高迁移率蛋白1（HMGB-1），中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL），基质金属蛋白酶8（MMP-8）用ELISA验证在脓毒症与疾病对照组的外周血单个核细胞表达中差异有统计学意义（P<0.01）。ROC曲线下面积均大于0.85，有较好的敏感度和特异度。

利用DIA-MS技术对脓毒症外周血单个核细胞进行研究检测，PLS-DA、OPLS-DA、PCA模式识别均能用于蛋白组学数据的分析，初步筛选HMGB-1、NGAL、MMP-8是值得进一步研究的脓毒症外周血单个核细胞候选生物标志物。