在单个PCR管内快捷完成定点突变

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：yuyuallen

【摘要】

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采用大引物方法,利用质粒多克隆位点两侧的普通测序引物作为旁侧引物,在单个PCR管内,经2个步骤共34个循环进行定点突变.该方法通过优化模板和引物的量达到降低PCR循环次数,通

【作者】

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谢振华史小军蔡国平

【机构】

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清华大学深圳研究生院生命科学与海洋生物学实验室

【出处】

：

中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

2006年8期

【关键词】

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定点突变 PCR 大引物 site-directed mutagenesis PCR megaprimer

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采用大引物方法,利用质粒多克隆位点两侧的普通测序引物作为旁侧引物,在单个PCR管内,经2个步骤共34个循环进行定点突变.该方法通过优化模板和引物的量达到降低PCR循环次数,通过加入10个在68℃复性条件下的PCR循环达到增加突变效率而无需胶纯化.本方法达到平均62%的突变效率,而且全长扩增产物的产率很高.

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